[发明专利]抗南方根结线虫黄瓜渐渗系材料的培育方法

说明书

技术领域

本发明属于生物技术育种领域，涉及抗南方根结线虫黄瓜渐渗系材料的培育方法。

背景技术

南方根结线虫(Meloidogyne incognita)是危害黄瓜(Cucumis sativus L.)生产的主要病原线虫^[1、2]，全球每年因此而造成的损失高达1000亿美元以上^[3]，年损失率约10％^[4]，已成为影响黄瓜生产的严重障碍之一。目前在黄瓜栽培种中尚未发现抗南方根结线虫的种质资源^[5、6、7]。由于黄瓜遗传基础非常狭窄，变异率仅为3-8％^[8]，因此，通过种内变异获得抗南方根结线虫黄瓜品种是难以实现的。诸多研究表明，甜瓜属一些近缘野生种，如C.metuliferus E.Meyer ex Naudin，C.anguria L.，C.ficifolius A.Rich，C.heptadactylus Naud.，C.longipes Hook和C.hystrix Chakr等，对南方根结线虫具有抗性^[9、10]，因此，通过远缘杂交转移近缘野生种中的抗性基因以拓宽黄瓜遗传基础，并选育抗病新品种是一条解决黄瓜抗性问题的有效途径。

远缘杂交是创造新物种、新材料的有效途径之一，同时可以向栽培作物中导入外源有益基因，扩大作物的遗传基础，提高作物的抗病、抗逆性等。在栽培黄瓜的近缘物种中，蕴藏着许多对黄瓜改良及其有用的基因，很早就受到葫芦科育种者的重视，但由于种间杂交严重不亲和，杂交后代的不育，许多试验均未取得成功。陈劲枫于1989年在我国云南西双版纳采集到1个甜瓜属珍稀野生种(C.hystrix Chakr.)，实验证明其具有多种抗病性，如抗蔓枯病、根结线虫病等多种病害，并成功的获得了其与栽培品种之间的种间杂种F₁，利用体细胞无性系变异途径加倍杂种染色体，获得了人工双二倍体新种质(C.hytivus)，C.hytivus可作为遗传桥梁，通过与栽培黄瓜品种不断回交、自交，得到黄瓜-酸黄瓜种间杂交渐渗系，这些渐渗系经分子标记验证已含有酸黄瓜野生种C.hystrix的部分片段^[11]。

发明内容

本发明的目的是针对现有技术的上述不足，提供一种抗南方根结线虫黄瓜渐渗系材料的培育方法。

本发明的另一目的是提供黄瓜抗南方根结线虫材料的筛选鉴定方法，该方法同时也可为其他作物抗根结线虫病接种鉴定提供参考。

本发明的目的可通过如下技术方案实现：

抗南方根结线虫黄瓜渐渗系材料的培育方法，包含如下步骤：

(1)黄瓜种间杂交渐渗系的获得：以栽培黄瓜‘北京截头’为父本，野生种酸黄瓜为母本杂交获得杂种F₁，杂种F₁通过胚胎拯救结合体细胞无性系变异对其染色体进行加倍，加倍后获得种间双二倍体新种，命名为Cucumis hytivus，以双二倍体新种Cucumis hytivus为母本，与栽培品种‘北京截头’回交1～2代，然后再自交3～5代获得其多代回交自交后代群体株系，即黄瓜种间杂交渐渗系；

(2)黄瓜种间杂交渐渗系抗南方根结线虫接种鉴定：制备1mL含1000个虫卵的南方根结线虫接种液，按照2000卵/株的接种量接种步骤(1)获得的黄瓜种间杂交渐渗系幼苗，接种8周后将黄瓜种间杂交渐渗系植株的根剪下，统计每株根系的根结数及卵块数，按如下公式计算病级指数DI，1＜DI≤2的株系即为抗南方根结线虫黄瓜渐渗系材料：

DI＝∑(Sini)/N；其中si为发病级别，ni为相应发病级别的株数，i＝病情分级的各个级别，N＝调查总株数，发病级别si的分级标准为：0级无根结；1级1～2个根结和卵块；2级3～10个根结和卵块；3级11～30个根结和卵块；4级31～100个根结和卵块；5级100个以上根结和卵块。

所述的所述的野生种酸黄瓜较栽培黄瓜‘北京截头’提前2个月播种，并对其进行40d以上的光照处理，使两者花期相遇。

所述的黄瓜种间杂交渐渗系抗南方根结线虫接种鉴定具体步骤如下：

1)病原物繁殖与保存  将南方根结线虫卵接种到感病番茄品种‘苏粉2号’上，于温室中进行繁殖保存备用，每3个月转接一次；