[发明专利]家蚕中部丝腺细胞合成分泌溶菌酶的方法有效
| 申请号： | 201110123584.8 | 申请日： | 2011-05-13 |
| 公开（公告）号： | CN102226202A | 公开（公告）日： | 2011-10-26 |
| 发明（设计）人： | 钟伯雄;危浩;庄兰芳 | 申请（专利权）人： | 浙江大学 |
| 主分类号： | C12N15/85 | 分类号： | C12N15/85;A01K67/04 |
| 代理公司： | 杭州求是专利事务所有限公司 33200 | 代理人： | 林怀禹 |
| 地址： | 310027 浙*** | 国省代码： | 浙江;33 |
| 权利要求书： | 查看更多 | 说明书： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 家蚕 中部 腺细胞 合成 分泌 溶菌酶 方法 | ||
1.一种家蚕中部丝腺细胞合成分泌溶菌酶的方法，其特征在于该方法的步骤如下：
（1）采用分子生物学技术构建家蚕合成分泌溶菌酶的载体pBSer1hLYZ-A3EGFP质粒；
（2）采用显微注射转基因家蚕方法将pBSer1hLYZ-A3EGFP质粒及能够提供转座酶trans的辅助质粒导入家蚕受精卵内，蚕卵孵化后饲养至成虫，自交续代为G1代，在G1代转基因家蚕的小蚕期，通过荧光体视显微镜观察选择表达EGFP标志基因的转基因家蚕，饲养至成虫与丝胶蚕杂交续代为G2代，G2代以后再与丝胶蚕回交3-5代，以表达EGFP标志基因及丝胶蚕性状为每代的留种筛选标志；
（3）与丝胶蚕多次回交后的蚕，再采用自交的方法使溶菌酶基因纯合，采用转基因昆虫荧光基因表达相对量无损伤测定方法选择溶菌酶基因纯合的转基因家蚕，育成中部丝腺细胞能够合成分泌溶菌酶、基因纯合的转基因家蚕新品种。
2.根据权利要求1所述的一种家蚕中部丝腺细胞合成分泌溶菌酶的方法，其特征在于：所述的pBSer1hLYZ-A3EGFP质粒是以piggyBac转座质粒为基础，质粒带有Amp抗性基因以用于质粒的扩增和筛选，包含 piggyBac转座子的2个转座臂PBL和PBR，包含 2个功能表达框，一个是A3启动子启动的绿色荧光蛋白基因表达框A3 Promoter+EGFP+SV40，以用作转基因阳性家蚕的筛选标志，另一个是家蚕丝胶蛋白1启动子、带有便于提纯外源蛋白的His接头以及溶菌酶基因的表达框Ser1 Promoter +His+hLYZ+SV40，以表达溶菌酶，辅助质粒包含Amp抗性基因、piggyBac转座子的1个转座臂PBR、A3启动子启动的转座酶trans基因表达框A3 Promoter+ trans，以提供转座酶。
3.根据权利要求1所述的一种家蚕中部丝腺细胞合成分泌溶菌酶的方法，其特征在于：所述的以丝胶蚕性状为每代的留种筛选标志，其筛选的时期是蚕茧时期。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息，商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于浙江大学，未经浙江大学许可，擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作，请联系【客服】
本文链接：http://www.vipzhuanli.com/pat/books/201110123584.8/1.html，转载请声明来源钻瓜专利网。
