[发明专利]一种琼脂糖凝胶的N-羟基丁二酰亚胺修饰方法

权利要求书

1.一种琼脂糖凝胶的N-羟基丁二酰亚胺修饰方法，其特征在于：采用烯丙基缩水甘油醚活化琼脂凝胶上的羟基，加成巯基乙酸后，偶联N-羟基丁二酰亚胺，得到一种连接臂长度为10个原子、具有对氨基高度特异性的琼脂糖凝胶。

2.按照权利要求1所述的一种琼脂糖凝胶的N-羟基丁二酰亚胺修饰方法，其特征在于烯丙基缩水甘油醚的活化密度可控制在20-400μmol/mL，N-羟基丁二酰亚胺修饰密度可控制在20-150μmol/mL。

3.按照权利要求1所述的一种琼脂糖凝胶的N-羟基丁二酰亚胺修饰方法，其特征在于所用的琼脂糖凝为市售进口或国产琼脂糖凝胶，型号为4FF和6FF，粒径范围30-150μm。

4.按照权利要求1所述的一种琼脂糖凝胶的N-羟基丁二酰亚胺修饰方法，其特征在于其方法的步骤如下：

1)烯丙基缩水甘油醚活化

将10mL琼脂糖凝胶水洗抽干，于砂芯漏斗中依次用5倍体积30％、70％丙酮洗涤，最后用5倍体积的100％二氧六环洗涤5次、抽干，转移到100ml具塞三角瓶中，加入10mL二氧六环、0.05-2mL烯丙基缩水甘油醚和50-300μL的三氟化硼乙醚，35℃下140rpm水浴摇床中反应45min，反应后的基质依次用5倍体积30％、70％丙酮洗涤，最后用大量去离子水洗涤干净；

2)双键加成巯基乙酸

取10mL活化基质，加入1.20mL巯基乙酸、10mL去离子水、0.25g过硫酸铵，60℃下反应8h；

3)N-羟基丁二酰亚胺基团的偶联

取10mL巯基乙酸羧化后的琼脂糖凝胶，分别用30％、70％和100％的丙酮溶液清洗，再用100％二氧六环清洗5次；将二氧六环替换后的琼脂糖凝胶转移到100mL带塞三角瓶中，加入10mL二氧六环、0.2-1g N-羟基丁二酰亚胺、0.2-1g多肽缩合试剂，25℃振荡8-12h；最后用大量二氧六环、甲醇、丙酮清洗介质，于异丙醇溶液中避光贮存备用。

5.按照权利要求4所述的一种琼脂糖凝胶的N-羟基丁二酰亚胺修饰方法，其特征在于所用的多肽试剂为N，N，-二环己基碳二亚胺或1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺。