[发明专利]一种LMP-1重组腺相关病毒载体及其构建方法与应用

说明书

本发明为分案申请。原申请日为2008年4月23日，申请号200880012949.6，发明名称为“一组重组腺相关病毒载体及其构建方法与应用”。 

技术领域

本发明涉及生物领域中的载体及其应用，特别是涉及一种LMP-1重组腺相关病毒载体及其构建方法与其在制备抗肿瘤药物中的应用。 

背景技术

腺相关病毒(AAV)的基因结构已经被鉴定。1983年，Samulski等人描述了AAV的末端重复片段(上游5’端片段，下游3’端片段)(Samulski RJ，Srivastava A，Berns KI，Muzyczka N.Rescue of adeno-associated virus from recombinant plasmids：gene correction within the terminal repeats of AAV.Cell.33：135-143.)。1984年，Hermonat等人描述了AAV的低感染颗粒(lip)基因和包膜(cap)基因(Hermonat PL，Labow MA，Wright R，Berns KI，Muzyczka N.Genetics of adeno-associated virus：isolation and preliminary characterization of adeno-associated virus type 2 mutants. J Virol.51：329-339.Hermonat，P.L.，and Muzyczka，N.Use of adeno-associated virus as a mammalian DNA cloning vector：transduction of neomycin resistance into mammalian tissue culture cells.Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.81：6466-6470.)。1986年，Labow等人鉴定了位于上游5’端片段和rep基因之间的p5启动子(Labow MA，Hermonat PL，Berns KI.Positive and negative autoregulation of the adeno-associated virus type2 genome.J Virol.160：251-258.)。 

1984年，美国博沃基因国际有限公司的主要技术技术负责人之一Paul L.Hermonat教授率先证明AAV载体可用于人类疾病的基因治疗(Hermonat，P.L.，and Muzyczka，N.Use of adeno-associated virus as a mammalian DNA cloning vector：transduction of neomycin resistance into mammalian tissue culture cells.Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.81：6466-6470.)。目前，主要是欧美国家在进行以AAV为基础的基因治疗人类疾病的临床试验。据美国粮食和药品管理局统计，现有十余项以AAV为基础的基因治疗临床试验正在进行，主要是将携带治疗基因的AAV病毒注入患者体内，使其在体内表达治疗基因，从而达到治疗疾病的目的。主要针对治疗的疾病有帕金森氏综合症、风湿性关节炎、血友病、心力衰竭、进行性肌萎缩和奥兹海默综合症等非肿瘤性疾病。但是，应用于临床治疗的AAV病毒仍存在一些问题，例如携 带治疗基因大小受到明显限制，病毒本身不稳定，导致治疗基因表达不稳定，以及造成疗效不一致。虽然AAV病毒本身的免疫原性很弱，但所表达的治疗基因容易在患者体内诱发自身免疫反应，甚至导致严重的毒副作用。