[发明专利]一种固相多肽合成人脑钠素的制备方法

权利要求书

1.本发明是一种固相多肽合成人脑钠素的制备方法，包括以下步骤：  

 （1）以Fmoc-His(trt)-Wang-树脂为起始原料，按照固相合成的方法依次连接具有Fmoc-保护基团的氨基酸，获得保护的三十二肽树脂，其间依次脱去Fmoc-保护基团； 

 （2）切肽同时去除侧链保护基团，获得前体粗品；

 （3）前体粗品经制备型HPLC，分离纯化；

 （4）在液相中进行二硫键环化；

 （5）HPLC纯化二硫键环化后的人脑钠素； 

 （6）转化成人脑钠素；

（7）冻干后，制得人脑钠素精品。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所说的依次连接具有Fmoc-保护基团的氨基酸，获得保护三十二肽的树脂，包括如下步骤：

   （1）将Fmoc-His(trt)-Wang树脂用DMF浸泡15分钟，使树脂溶胀；

树脂的重量体积浓度为50ml/g；

   （2）在上述的树脂中，加入脱保护试剂，进行脱保护反应，抽干，用DMF洗涤，抽干，然后加入用接肽试剂溶解的具有Fmoc保护基团的氨基酸、HBTU/HOBt和DIPEA的混合物，接肽反应，抽干，用DMF洗涤，抽干，然后再加入脱保护试剂，脱保护反应，再加入用接肽试剂溶解的具有Fmoc保护基团的氨基酸，如此重复，获得

Fmoc-Ser(tBu)-Pro-Lys(Boc)-Met-Val Glu(OtBu)-Gly-Ser(tBu)-Gly-Cys(Trt)-Phe-Gly-Arg(pbf)-Lys(Boc)-Met-Asp(OtBu)-Arg(pbf)-Ile-Ser(tBu)-Ser(tBu)-Ser(tBu)-Ser(tBu)-Gly-Leu-Gly-Cys(Trt)-Lys(Boc)-Val-Leu-Arg(pbf)-Arg(pbf)-His(trt)-Wang树脂 

所说的具有Fmoc保护基团的氨基酸，依次为：

Fmoc-Arg(pbf)-OH

Fmoc-Arg(pbf)-OH

Fmoc-Leu-OH

Fmoc-Val-OH

Fmoc- Lys(Boc)-OH

Fmoc-Cys(Trt)-OH

Fmoc-Gly-OH

Fmoc-Leu-OH

Fmoc-Gly-OH

Fmoc-Ser(tBu)-OH

Fmoc-Ser(tBu)-OH

Fmoc-Ser(tBu)-OH

 Fmoc-Ser(tBu)-OH

 Fmoc-Ile-OH

 Fmoc-Arg(pbf)-OH

 Fmoc-Asp(OtBu)-OH

 Fmoc-Met-OH

 Fmoc-Lys(Boc)-OH

 Fmoc-Arg(pbf)-OH

 Fmoc-Gly-OH

 Fmoc-Phe-OH

 Fmoc-Cys(Trt)-OH

 Fmoc-Gly-OH

 Fmoc-Ser(tBu)-OH

 Fmoc-Gly-OH

 Fmoc-Glu(OtBu)-OH

 Fmoc-Val-OH

 Fmoc-Met-OH

 Fmoc-Lys(Boc)-OH

 Fmoc-Pro-OH

 Fmoc-Ser(tBu)-OH。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所说的脱保护试剂的组分和体积比为：

PIP∶DMF=1∶5，体积比；

     所说的接肽试剂为：DIPEA∶DMF=1∶10，体积比；

     脱保护试剂的体积与树脂的重量比例为50ml/g；

     接肽试剂的体积与树脂的重量比例为20ml/g；

HBTU的摩尔数为树脂的5倍；

HOBt的摩尔数为树脂的5倍；

Fmoc-His(trt)- OH的摩尔数为树脂的5倍。