[发明专利]伯克氏菌的制备及其在高效溶磷微肥中的应用无效
| 申请号： | 201110128569.2 | 申请日： | 2011-05-18 |
| 公开（公告）号： | CN102226161A | 公开（公告）日： | 2011-10-26 |
| 发明（设计）人： | 吴海燕;金荣德;刘淑霞;范作伟;高星爱;陈宝玉;刘春光;于雷;盖嘉慧;李明姝;王洪君;王巍巍 | 申请（专利权）人： | 吉林省农业科学院 |
| 主分类号： | C12N1/20 | 分类号： | C12N1/20;C05G3/00;C12R1/01 |
| 代理公司： | 吉林长春新纪元专利代理有限责任公司 22100 | 代理人： | 王薇 |
| 地址： | 130124 吉*** | 国省代码： | 吉林;22 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 伯克氏菌 制备 及其 高效 溶磷微肥 中的 应用 | ||
1.伯克氏菌的制备，其特征在于具体步骤如下：土壤样本的采集：（1）采集种植玉米的贫磷土壤放入塑料袋中，置于4℃的冰箱保存；（2）菌株（伯克氏菌）的分离及筛选，筛选培养基：葡萄糖10.0克，(NH4)2SO4 0.5克，NaCl 0.3克，KCl 0.3克，MgSO4·7H2O 0.3克，FeSO4·7H2O 0.03克，MnSO4·4H2O 0.03克，Ca3(PO4)2 10.0克，酵母粉 0.5 g 琼脂粉 15 g， PH值7.0～7.2，水 1000 mL；在121℃条件下灭菌20min然后制作平板固体培养基备用；将土壤样品在无菌条件下分别进行10倍梯度稀释，制成10－1～10－6系列稀释液，然后分别取0.1ｍＬ不同稀释度的样品以平板划线法涂布于以上制作的筛选平板培养基，28℃培养３ｄ后，选取产生透明圈（溶磷圈）较大的菌落转接到溶磷平板培养上，菌株纯化后，挑出，斜面保藏；（3）伯克氏菌溶磷能力的测定:以上述溶磷培养基为主要成分制作液体培养基，然后分别量取100 mL分装在250 mL三角瓶中，加入1 mL已培养24 h的菌液，28°C~30°C，120 r/min摇床培养，分别在48 h、72 h、96 h及120 h，取上清液进行钼锑抗比色法测定菌株溶解无机磷能力；（4）菌株的鉴定：对筛选获得的菌株进行了DNA测序和16S rRNA系统发育树构建，鉴定为伯克氏菌。
2.根据权利要求1所述的伯克氏菌的制备，其特征在于所述的伯克氏菌的序列为
Query 7 AGTTTGATCCTGGCTCAGATTGAACGCTGGCGGCATGCCTTACACATGCAAGTCGAACGG 66 ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Sbjct 1 AGTTTGATCCTGGCTCAGATTGAACGCTGGCGGCATGCCTTACACATGCAAGTCGAACGG 60
Query 67 CAGCACGGGTGCTTGCACCTGGTGGCGAGTGGCGAACGGGTGAGTAATACATCGGAACAT 126
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Sbjct 61 CAGCACGGGTGCTTGCACCTGGTGGCGAGTGGCGAACGGGTGAGTAATACATCGGAACAT 120
Query 127 GTCCTGTAGTGGGGGATAGCCCGGCGAAAGCCGGATTAATACCGCATACGATCTACGGAT 186
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Sbjct 121 GTCCTGTAGTGGGGGATAGCCCGGCGAAAGCCGGATTAATACCGCATACGATCTACGGAT 180
Query 187 GAAAGCGGGGGACCTTCGGGCCTCGCGCTATAGGGTTGGCCGATGGCTGATTAGCTAGTT 246
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Sbjct 181 GAAAGCGGGGGACCTTCGGGCCTCGCGCTATAGGGTTGGCCGATGGCTGATTAGCTAGTT 240
Query 247 GGTGGGGTAAAGGCCTACCAAGGCGACGATCAGTAGCTGGTCTGAGAGGACGACCAGCCA 306
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Sbjct 241 GGTGGGGTAAAGGCCTACCAAGGCGACGATCAGTAGCTGGTCTGAGAGGACGACCAGCCA 300
Query 307 CACTGGGACTGAGACACGGCCCAGACTCCTACGGGAGGCAGCAGTGGGGAATTTTGGACA 366
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Sbjct 301 CACTGGGACTGAGACACGGCCCAGACTCCTACGGGAGGCAGCAGTGGGGAATTTTGGACA 360
Query 367 ATGGGCGAAAGCCTGATCCAGCAATGCCGCGTGTGTGAAGAAGGCCTTCGGGTTGTAAAG 426
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Sbjct 361 ATGGGCGAAAGCCTGATCCAGCAATGCCGCGTGTGTGAAGAAGGCCTTCGGGTTGTAAAG 420
Query 427 CACTTTTGTCCGGAAAGAAATCCTTGGTTCTAATATAGCCGGGGGATGACGGTACCGGAA 486
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Sbjct 421 CACTTTTGTCCGGAAAGAAATCCTTGGTTCTAATATAGCCGGGGGATGACGGTACCGGAA 480
Query 487 GAATAAGCACCGGCTAACTACGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGTAGGGTGCGAGCGTTA 546
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Sbjct 481 GAATAAGCACCGGCTAACTACGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGTAGGGTGCGAGCGTTA 540
Query 547 ATCGGAATTACTGGGCGTAAAGCGTGCGCAGGCGGTTTGCTAAGACCGATGTGAAATCCC 606
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Sbjct 541 ATCGGAATTACTGGGCGTAAAGCGTGCGCAGGCGGTTTGCTAAGACCGATGTGAAATCCC 600
Query 607 CGGGCTCAACCTGGGAACTGCATTGGTGACTGGCAAGCTAGAGTATGGCAGAGGGGGGTA 666
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Sbjct 601 CGGGCTCAACCTGGGAACTGCATTGGTGACTGGCAGGCTAGAGTATGGCAGAGGGGGGTA 660
Query 667 GAATTCCACGTGTAGCAGTGAAATGCGTAGAGATGTGGAGGAATACCGATGGCGAAGGCA 726
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Sbjct 661 GAATTCCACGTGTAGCAGTGAAATGCGTAGAGATGTGGAGGAATACCGATGGCGAAGGCA 720
Query 727 GCCTCCTGGGCCAATACTGACGCTCATGCACGAAAGCGTGGGGAGCAAACAGGATTAGAT 786
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Sbjct 721 GCCCCCTGGGCCAATACTGACGCTCATGCACGAAAGCGTGGGGAGCAAACAGGATTAGAT 780
Query 787 ACCCTGGTAGTCCACGCCCTAAACGATGTCAACTAGTTGTTGGGGATTCATTTCCTTAGT 846
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Sbjct 781 ACCCTGGTAGTCCACGCCCTAAACGATGTCAACTAGTTGTTGGGGATTCATTTCCTTAGT 840
Query 847 AACGTAGCTAACGCGTGAAGTTGACCGCCTGGGGAGTACGGTCGCAAGATTAAAACTCAG 906
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Sbjct 841 AACGTAGCTAACGCGTGAAGTTGACCGCCTGGGGAGTACGGTCGCAAGATTAAAACTCAA 900
Query 907 AGGAATTGACGGGGACCCGCGCGAGCGGTGGATGATGTGGATTAATTCGATGCAACGCGA 966
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Sbjct 901 AGGAATTGACGGGGACCCGCACAAGCGGTGGATGATGTGGATTAATTCGATGCAACGCGA 960
Query 967 AAAACCTTACCTACCCTTGACATGGTCGGAATCCCGCTGAGAGGTGGGAGTGCTCGAAAG 1026
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Sbjct 961 AAAACCTTACCTACCCTTGACATGGTCGGAATCCCGCTGAGAGGTGGGAGTGCTCGAAAG 1020
Query 1027 AGAACCGGCGCACAGGTGCTGCATGGCTGTCGTCAGCTCGTGTCGTGAGATGTTGGGTTA 1086
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Sbjct 1021 AGAACCGGCGCACAGGTGCTGCATGGCTGTCGTCAGCTCGTGTCGTGAGATGTTGGGTTA 1080
Query 1087 AGTCCCGCAACGAGCGCAACCCTTGTCCTTAGTTGCTACGCAAGAGCACTCTAAGGAGAC 1146
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Sbjct 1081 AGTCCCGCAACGAGCGCAACCCTTGTCCTTAGTTGCTACGCAAGAGCACTCTAAGGAGAC 1140
Query 1147 TGCCGGTGACAAACCGGAGGAAGGTGGGGATGACGTCAAGTCCTCATGGCCCTTATGGGT 1206
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Sbjct 1141 TGCCGGTGACAAACCGGAGGAAGGTGGGGATGACGTCAAGTCCTCATGGCCCTTATGGGT 1200
Query 1207 AGGGCTTCACACGTCATACAATGGTCGGAACAGAGGGTTGCCAACCCGCGAGGGGGAGCT 1266
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Sbjct 1201 AGGGCTTCACACGTCATACAATGGTCGGAACAGAGGGTTGCCAACCCGCGAGGGGGAGCT 1260
Query 1267 AATCCCAGAAAACCGATCGTAGTCCGGATTGCACTCTGCAACTCGAGTGCATGAAGCTGG 1326
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Sbjct 1261 AATCCCAGAAAACCGATCGTAGTCCGGATTGCACTCTGCAACTCGAGTGCATGAAGCTGG 1320
Query 1327 AATCGCTAGTAATCGCGGATCAGCATGCCGCGGTGAATACGTTCCCGGGTCTTGTACACA 1386
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Sbjct 1321 AATCGCTAGTAATCGCGGATCAGCATGCCGCGGTGAATACGTTCCCGGGTCTTGTACACA 1380
Query 1387 CCGCCCGTCACACCATGGGAGTGGGTTTTACCAGAAGTGGCTAGTCTGACCGCAAGGAGG 1446
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Sbjct 1381 CCGCCCGTCACACCATGGGAGTGGGTTTTACCAGAAGTGGCTAGTCTAACCGCAAGGAGG 1440
Query 1447 ACGGTCACCACGGTAGGATTCATGACTGGGGTGAAGTCGTAACAAGGTAGCCGTA 1501
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Sbjct 1441 ACGGTCACCACGGTAGGATTCATGACTGGGGTGAAGTCGTAACAAGGTAGCCGTA 1495
Burkholderia sp. CEB01056 16S rRNA gene, strain CEB01056 Length=1523
Score = 2728 bits (1477), Expect = 0.0 Identities = 1489/1495 (99%), Gaps = 0/1495 (0%)
Strand=Plus/Plus。
3.伯克氏菌在溶磷微肥中的应用。
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