[发明专利]一种重组酶法生产右旋糖酐和果糖的方法

权利要求书

1.一种重组酶法生产右旋糖酐和果糖的方法，其特征在于：包括下述步骤：

（1）游离重组右旋糖酐蔗糖酶的制备：将基因工程菌株BL21 (DE3)/pET28-dexYG转接到含40-60 μg/mL卡那霉素的新鲜LB培养基中，并于35-40℃下培养15-18h，再将其接种到产酶培养基B中于35-40℃下发酵培养，当OD₆₀₀=2.5-4.0时，采用IPTG与乳糖联合诱导至IPTG终浓度为0.07-0.12 mmol/L、乳糖终浓度为2.0 -3.0g/L，诱导温度为20-30℃，诱导时间为4-6h；培养后的液体于0-5℃离心得菌体后加入 pH5.4醋酸缓冲液，超声破碎，离心取上清液即得重组右旋糖酐蔗糖酶液；

（2）以重组右旋糖酐蔗糖酶催化合成右旋糖酐和果糖：采用下述步骤：

（a）用50mL的5mmol/L的pH5.4乙酸-乙酸钠缓冲液溶解10-15g蔗糖配制酶底物反应液；再向其中加入酶活70-170u/ml的重组右旋糖酐蔗糖酶液10-15 mL后，用5mmol/L的pH5.4乙酸-乙酸钠缓冲液定容到100mL；

（b）在25-30℃下反应开始时采用振荡器对反应液进行120n/min 振荡5h,然后静置反应5h,依此交替进行反应，22-25h后结束催化反应；

（c）将催化后的反应液进行醇沉洗涤，真空干燥称重，得到高分子右旋糖酐，将醇沉液经过离心过滤去除大分子杂质,再经过超滤去除小分子低聚糖、滤液经过真空浓缩、喷雾干燥得到果糖。

2.如权利要求1所述的重组酶法生产右旋糖酐和果糖的方法，其特征在于：所述步骤（1）中培养基B用于大肠杆菌的发酵和酶的诱导，其中含有甘油、蛋白胨及培养基常用的无机盐组分。

3.如权利要求1所述的重组酶法生产右旋糖酐和果糖的方法，其特征在于：所述步骤（1）中发酵培养时，当OD₆₀₀=3.0时，采用IPTG与乳糖联合诱导法制备右旋糖酐蔗糖酶，加入IPTG和乳糖的终浓度分别为0.09mmol/和2.5g/L，然后于25℃诱导培养。

4.如权利要求1所述的重组酶法生产右旋糖酐和果糖的方法，其特征在于：所述步骤（2）中加入的重组右旋糖酐蔗糖酶液酶活为145-170u/ml。