[发明专利]一种电穿孔转染昆虫细胞的方法无效
| 申请号： | 201110133422.2 | 申请日： | 2011-05-23 |
| 公开（公告）号： | CN102250842A | 公开（公告）日： | 2011-11-23 |
| 发明（设计）人： | 井申荣;杨靖佳;曾韦锟;黄芬 | 申请（专利权）人： | 昆明理工大学 |
| 主分类号： | C12N7/01 | 分类号： | C12N7/01;C12N15/866;C12N5/10 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 650093 云*** | 国省代码： | 云南;53 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 穿孔 转染 昆虫 细胞 方法 | ||
【权利要求书】：
1.一种电穿孔转染昆虫细胞的方法，其特征在于所述方法按如下步骤进行：
1）构建含报告基因的重组杆状病毒基因组
报告基因经过酶切重组到穿梭质粒中形成含报告基因的重组穿梭质粒后，在大肠杆菌中通过同源重组构建含报告基因的重组杆状病毒基因组；
2）电穿孔转染昆虫细胞
将重组杆状病毒基因组和昆虫细胞在电穿孔缓冲液中混和，在电穿孔仪器中按照电穿孔条件进行电穿孔转染，从而将外源基因转染到昆虫细胞中，所述的电穿孔缓冲液为200-400mM蔗糖，7-13mM Na3PO4，1-3mM MgCl2，pH6.2-6.6；电穿孔条件为电压 100-140V，电击时间25-35ms，温度0-25℃。
2.根据权利要求1所述的电穿孔转染昆虫细胞的方法，其特征是穿梭质粒为pFastBac1、pFastBacTM Dual、pBacPak、pAcSG及其衍生质粒。
3.根据权利要求1或2所述的电穿孔转染昆虫细胞的方法，其特征是昆虫细胞为Sf-9细胞、Sf-21细胞、High Five细胞 。
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