[发明专利]一种酶联检测试剂盒及其制备方法

权利要求书

1.一种酶联检测试剂盒，其组成为：

酶联板、阳性对照、阴性对照、样品稀释液、酶联物、浓缩洗涤液、显色剂A＆B、终止液和封板胶纸；

其中：

酶联板为血管内皮细胞生长因子单克隆抗体包被的酶联反应板；

酶联物为辣根过氧化物酶标记血管内皮生长因子多克隆抗体 。

2.权利要求1的试剂盒，其特征在于：

阳性对照为血管内皮细胞生长因子蛋白冻干粉；

阴性对照为动物血清冻干粉；

样品稀释液为0.05%吐温-20, 1%牛血清白蛋白，10mM乙二胺四乙酸二钠，0.05%硫柳汞，0.4M NaCl，pH6.5;

浓缩洗涤液为137mM NaCl，2.7 mM KCl, 10mM Na₂HPO₄，2 mMKH₂PO₄ , 0.05%吐温-20, Ph7.4；

显色剂A、B，其中A液为H₂O₂溶液，B液为3，3^＇,5 ,5^＇-四甲基联苯胺溶液；

终止液为2MH₂SO₄ 。

3.权利要求1的试剂盒，其特征在于，各物质的量以酶联板的孔数为标准。

4.权利要求1的试剂盒，其特征在于，所述酶联板为96孔。

5.上述试剂盒的制备和操作方法，主要步骤为：

（a）将血管内皮细胞生长因子单克隆抗体包被于固体支持物酶联反应板上；

（b）用封闭液封闭；

（c）将生物标本加入到预包被的酶联反应板反应孔中，生物标本中的血管内皮细胞生长因子特异地与血管内皮细胞生长因子单克隆抗体结合；

（d）用血管内皮细胞生长因子多克隆抗体检测血管内皮细胞生长因子；

（e）显色底物为3，3^＇,5 ,5^＇-四甲基联苯胺溶液。

6.权利要求5的方法，其特征在于，步骤a所述的单克隆抗体是用血管内皮细胞生长因子免疫小鼠所得。

7.权利要求5的方法，其特征在于，步骤c所述的生物标本为癌症、血管病、糖尿病视网膜病及类风湿关节炎的血清、血浆、脑脊液、唾液、组织提取液或尿液。

8.权利要求5的方法，其特征在于，步骤d所述的血管内皮细胞生长因子多克隆抗体制备用的血管内皮细胞生长因子用昆虫细胞表达并用Ni柱纯化。

9.权利要求5的方法，其特征在于，步骤d所述的多克隆抗体是用血管内皮细胞生长因子免疫家兔所得。

10.权利要求5的方法，其特征在于，步骤d所述的多克隆抗体用辣根过氧化物酶标记。

11.权利要求6的方法，其特征在于，所述的血管内皮细胞生长因子用昆虫细胞表达并用Ni柱纯化。