[发明专利]检测水体中是否存在杀虫剂及杀虫剂含量范围的试剂盒

权利要求书

1.确定待测水体中杀虫剂的试剂盒，包括如下组分：XB1蛋白、固兰B盐和β-乙酸萘酯；所述XB1蛋白为如下(a)或(b)或(c)：

(a)序列表的序列1所示的蛋白质；

(b)序列表的序列1自N末端第39至574位氨基酸残基所示的蛋白质；

(c)序列表的序列1自N末端第1至574位氨基酸残基所示的蛋白质；

所述确定待测水体中杀虫剂为确定待测水体中是否含有杀虫剂和/或确定待测水体中的杀虫剂含量范围。

2.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒由酶管、底物管、显色剂管和pH7.050mM磷酸缓冲液组成；所述酶管中装有所述XB1蛋白；所述底物管中装有所述β-乙酸萘酯；所述显色剂管中装有所述固兰B盐。

3.如权利要求1或2所述的试剂盒，其特征在于：所述pH7.050mM磷酸缓冲液是将磷酸氢二钠Na₂HPO₄·12H₂O和磷酸二氢钠NaH₂PO₄·2H₂O溶于水得到的。

4.如权利要求1至3中任一所述的试剂盒，其特征在于：所述XB1蛋白的制备方法包括如下步骤：

(1)将序列表的序列2自5’末端第115至1725位核苷酸所示的DNA分子插入载体pET28a的多克隆位点，得到重组表达载体；

(2)将所述重组表达载体导入大肠杆菌BL21(DE3)，得到重组菌；

(3)将所述重组菌进行诱导表达，得到XB1蛋白。

5.如权利要求4所述的试剂盒，其特征在于：所述诱导表达的方法为：在OD₆₀₀＝0.6的重组农杆菌菌液中加入终浓度为1mM的IPTG诱导培养16-18h。

6.如权利要求4或5所述的试剂盒，其特征在于：所述方法还包括将诱导表达后的重组菌进行超声破碎并离心取上清液的步骤；所述超声破碎为参数优选为：超声频率14HZ、间隔10秒进行一次超声处理、每次超声处理的时间为5秒、超声处理20次；所述离心的参数优选为：4℃、12000g、15分钟。

7.权利要求1至6中任一所述试剂盒在确定待测水体中杀虫剂中的应用；所述确定待测水体中杀虫剂为确定待测水体中是否含有杀虫剂和/或确定待测水体中的杀虫剂含量范围。

8.一种辅助确定待测水体中杀虫剂的方法，包括如下步骤：

(1)将取自待测水体的样本和蒸馏水样本分别用甲苯进行抽提，收集抽提液；

(2)将抽提液中的甲苯挥发后，剩余物质溶于乙醇水溶液；

(3)在步骤(2)的溶液中加入XB1蛋白共孵育；所述XB1蛋白为如下(a)或(b)或(c)：(a)序列表的序列1所示的蛋白质；(b)序列表的序列1自N末端第39至574位氨基酸残基所示的蛋白质；(c)序列表的序列1自N末端第1至574位氨基酸残基所示的蛋白质；

(4)在步骤(3)的溶液中加入β-乙酸萘酯共孵育；

(5)将步骤(4)的溶液中加入固兰B盐，通过比较待测水体样本和蒸馏水样本的颜色辅助确定待测水体中杀虫剂；所述确定待测水体中杀虫剂为确定待测水体中是否含有杀虫剂和/或确定待测水体中的杀虫剂含量范围。

9.如权利要求8所述的方法，其特征在于：所述乙醇水溶液中乙醇的含量为50％(体积百分含量)。

10.如权利要求8或9所述的方法，其特征在于：所述步骤(3)中孵育时间为5分钟；所述步骤(4)中共孵育的时间为3分钟。