[发明专利]检测水体中是否存在杀虫剂及杀虫剂含量范围的试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及一种检测水体中是否存在杀虫剂及杀虫剂含量范围的试剂盒。 

背景技术

施用农药防治农作物的病、虫、草、鼠害是保障我国“两高一优”农业持续稳定发展的重要措施之一。但是，农药的使用是一把双刃剑，由于农药的大量滥用，施用区的水质受污染，生态平衡被破坏，同时，不合理使用化学农药，引起害虫抗性的迅速发展增强，迫使农药的用量和次数相应增加，对农药的使用和依赖程度呈现出恶性循环状态，造成农药施用和残留超标现象日渐加重。农药使用中只有10-20％左右的剂量到达目标害虫，其余大部分的农药或附着于作物与土壤表面，或飘散在大气中，通过降雨等经地表径流进入地表水和地下水，污染水体、土壤和农业生态系统。 

在农药之中，有机磷农药对身体极为有害。低剂量的有机磷农药可使人产生慢性中毒，对人体致癌、致畸、致突变的危害是不容质疑的。急性中毒可引起肌肉痉挛、瞳孔收缩、呼吸困难，甚至引发死亡。 

目前，大多数污水中农药残留的检测需要运用大型仪器，费时费力。 

发明内容

本发明的目的是提供一种检测水体中是否存在杀虫剂及杀虫剂含量范围的试剂盒。 

本发明提供了一种确定待测水体中杀虫剂的试剂盒，包括如下组分：XB1蛋白、固兰B盐和β-乙酸萘酯； 

所述XB1蛋白为如下(a)或(b)或(c)： 

(a)序列表的序列1所示的蛋白质； 

(b)序列表的序列1自N末端第39至574位氨基酸残基所示的蛋白质； 

(c)序列表的序列1自N末端第1至574位氨基酸残基所示的蛋白质； 

所述确定待测水体中杀虫剂为确定待测水体中是否含有杀虫剂和/或确定待测水体中的杀虫剂含量范围。 

所述试剂盒具体可由酶管、底物管、显色剂管和pH7.050mM磷酸缓冲液组成；所述酶管中装有所述XB1蛋白；所述底物管中装有所述β-乙酸萘酯；所述显色剂管中装有所述固兰B盐。 

所述pH7.050mM磷酸缓冲液具体可为将磷酸氢二钠Na₂HPO₄·12H₂O和磷酸二氢钠NaH₂PO₄·2H₂O溶于水得到的缓冲液。 

所述试剂盒可用于确定待测水体中的杀虫剂；所述确定待测水体中的杀虫剂为确定待测水体中是否含有杀虫剂和/或确定待测水体中的杀虫剂含量范围。 

本发明还保护一种辅助确定待测水体中的杀虫剂的方法，包括如下步骤： 

(1)将取自待测水体的样本和蒸馏水样本分别用甲苯进行抽提，收集抽提液； 

(2)将抽提液中的甲苯挥发后，剩余物质溶于乙醇水溶液； 

(3)在步骤(2)的溶液中加入XB1蛋白共孵育；所述XB1蛋白为如下(a)或(b)或(c)：(a)序列表的序列1所示的蛋白质；(b)序列表的序列1自N末端第39至574位氨基酸残基所示的蛋白质；(c)序列表的序列1自N末端第1至574位氨基酸残基所示的蛋白质； 

(4)在步骤(3)的溶液中加入β-乙酸萘酯共孵育； 

(5)将步骤(4)的溶液中加入固兰B盐，通过比较待测水体样本和蒸馏水样本的颜色确定待测水体中的杀虫剂；所述确定待测水体中的杀虫剂为确定待测水体中是否含有杀虫剂和/或确定待测水体中的杀虫剂含量范围(如果待测水体样本的颜色比蒸馏水样本颜色明显减弱，即可判定有杀虫剂的存在)。 

所述乙醇水溶液中乙醇的含量具体可为50％(体积百分含量)。 

所述步骤(3)中共孵育时间具体可为5分钟。 

所述步骤(4)中共孵育的时间具体可为3分钟。 

所述XB1蛋白的制备方法具体可包括如下步骤： 

(1)将序列表的序列2自5’末端第115至1725位核苷酸所示的DNA分子插入载体pET28a的多克隆位点，得到重组表达载体； 

(2)将所述重组表达载体导入大肠杆菌BL21(DE3)，得到重组菌； 

(3)将所述重组菌进行诱导表达，得到XB1蛋白。 

所述诱导表达的方法具体可为：在OD₆₀₀＝0.6的重组农杆菌菌液中加入终浓度为1mM的IPTG诱导培养16-18h。 

所述方法还可包括将诱导表达后的重组菌进行超声破碎并离心取上清液的步骤。