[发明专利]一种分子改良型凋亡素（30～121）及其制备方法和应用有效
| 申请号： | 201110139231.7 | 申请日： | 2011-05-26 |
| 公开（公告）号： | CN102250223A | 公开（公告）日： | 2011-11-23 |
| 发明（设计）人： | 王剑松;詹辉;杨峻峰;王春晖 | 申请（专利权）人： | 王剑松 |
| 主分类号： | C07K14/01 | 分类号： | C07K14/01;C12N15/34;C12N15/63;A61K38/16;A61P35/00 |
| 代理公司： | 昆明协立知识产权代理事务所(普通合伙) 53108 | 代理人： | 旃习涵 |
| 地址： | 650000 云南*** | 国省代码： | 云南;53 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 分子 改良 型凋亡素 30 121 及其 制备 方法 应用 | ||
1.一种分子改良型凋亡素(30～121)，其特征在于，该凋亡素序列具有SEQ ID № 2所述的氨基酸序列。
2.根据权利要求1所述的分子改良型凋亡素(30～121)，其特征在于，具有SEQ ID № 1所述的核苷酸序列。
3.一种分子改良型凋亡素(30～121)的制备方法，其特征在于，该方法采用以下步骤：
(1)在本发明前期通过基因拼接法，据NCBI gene bank中VP3基因序列，设计基因合成所用的寡核苷酸序列(Oligo1-Oligo20)及PCR扩增引物p1、p2，将Oligo1到Oligo20共20条引物，两两重叠，覆盖整个VP3基因编码区；经过磷酸化、退火、连结酶连结后作为模板，利用p1、p2引物进行PCR扩增；反应条件为：94℃变性3分钟，进入循环，循环条件为94℃变性30秒、55℃退火45秒、72℃延伸1分钟，共35个循环，成功构建出凋亡素VP3(1-121)；经测序验证：经过基因拼接法得到的VP3(1-121)序列与NCBI基因库完全一致，见序列表SEQ ID № 3；
(2)据VP3的基因序列设计VP3(30-121)的引物，分别为-N端和-C端引物，据碱基互补配对原则、GC比值和酶切位点等相关因素设计引物序列，并交上海生工合成。将引物与底物VP3(1-121)加入同一PCR体系进行扩增，扩增产物凋亡素VP3(30-121)送测序后验证其序列完全符合NCBI所述，见SEQ ID № 1。
4.权利要求1所述的分子改良型凋亡素(30～121)在制备抗肿瘤药物中的应用。
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