[发明专利]鸭模拟小肠液的制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种动物模拟消化液的制备方法，尤指一种鸭模拟小肠液的制备方法。

背景技术

我国的鸭饲养量占世界总量的70％以上。在鸭日粮的配制中，饲料原料的能量及氨基酸生物学效价一直是饲料配方首先需要了解的参数。然而，用生物学法测定饲料原料的代谢能及可消化氨基酸数据耗时、耗力、耗资，已成为生产中饲料原料基础数据更新的主要技术瓶颈。长期以来，各国营养学家试图通过模拟饲料在动物体内的消化来建立一种快速定量测定饲料能量、氨基酸生物学效价的技术体系，以实现对饲料养分生物学效价的实时监测。但是这种技术体系始终没有真正在产业上建立起来，一直处于实验阶段。

上世纪90年代以来，欧美学者在家禽模拟小肠液的制备上是根据一定时间内饲料的水解率达到最大时所需要的最低猪胰液素(酶)量来确定的(见参考文献：Valdes，E.V.，S.Leeson.Measurement of metabolizable energy in poultry feeds by an in vitro system，Poultry Science，1992，71：1493-1503)。由该方法制备的模拟小肠液，在消化活性上不仅难以完全重复，而且还脱离了动物体内单位体积肠液中消化酶活性的生理水平。此外，这种方法在酶的来源上采用试剂级猪胰液素，从而导致消化酶的酶学特性可能与家禽体内的相应消化酶不同源。

近年来，一些学者在动物模拟消化液的制备上又将突破点转移到消化生理学的基础理论上，以家禽小肠液的制备为研究对象，获得了效果良好的模拟家禽小肠液。但是，这种模拟家禽小肠液的制备方法采用的是试剂级的单一消化酶，且消化酶多为猪源性或微生物来源，因此存在着酶学特性不同源的问题，而且实施成本很高，很难为畜牧企业进行饲料养分生物学效价检测的成本核算所接受。因此，开辟新的途径来制备家禽模拟小肠液势在必行。

发明内容

本发明的目的在于提供一种鸭模拟小肠液的制备方法，该方法实施成本低，生产工艺高效快速，可制备出与真实鸭子体内小肠液α-淀粉酶、脂肪酶、胰蛋白酶、糜蛋白酶4种消化酶基本同源的鸭模拟小肠液。

为了实现上述目的，本发明采用了以下技术方案：

一种鸭模拟小肠液的制备方法，其特征在于：该方法包括如下步骤：

步骤一：将从设定数量的制液用鸭子的鸭小肠中采集来的鸭小肠食糜放入一个试剂瓶中摇匀，将摇匀后得到的混合物放入一个离心瓶中，在设定温度下通过离心机进行离心处理，在离心处理结束后，收集该离心瓶中的上清液；

步骤二：将步骤一得到的上清液过滤后，经冷冻干燥机冷冻浓缩成混合浓缩液；

步骤三：将步骤二得到的混合浓缩液经透析袋透析去除杂质后，冷冻干燥成冻干粉；

步骤四：分别测定步骤三得到的冻干粉中α-淀粉酶、脂肪酶、胰蛋白酶、糜蛋白酶的活性，以及测定试剂级α-淀粉酶中α-淀粉酶的活性、试剂级脂肪酶中脂肪酶的活性、试剂级胰蛋白酶中胰蛋白酶和糜蛋白酶的活性、试剂级糜蛋白酶中糜蛋白酶和胰蛋白酶的活性；

步骤五：根据鸭模拟小肠液与目标鸭小肠液中各消化酶总活性相等的原则，向设定重量的冻干粉中加入相应容量的试剂级α-淀粉酶、相应重量的试剂级脂肪酶、相应重量的试剂级胰蛋白酶、相应重量的试剂级糜蛋白酶以及相应容量的水溶液，以制备出鸭模拟小肠液，该制备出的鸭模拟小肠液中α-淀粉酶、脂肪酶、胰蛋白酶、糜蛋白酶的活性分别与目标鸭小肠液中α-淀粉酶、脂肪酶、胰蛋白酶、糜蛋白酶的活性相等。

本发明的优点是：

本发明制备出的鸭模拟小肠液中4种主要消化酶(α-淀粉酶、胰蛋白酶、糜蛋白酶、脂肪酶)的活性(水解能力)与实际的鸭小肠液一样，可做为一种模拟饲料在鸭小肠内消化的消化液。

本发明不是使用单一的试剂级消化酶(试剂级消化酶多为猪源性或微生物来源，存在酶学特性不同源问题)来制备鸭模拟小肠液，而是主要使用真实鸭子的小肠液中的4种主要消化酶(α-淀粉酶、胰蛋白酶、糜蛋白酶、脂肪酶)配以试剂级消化酶(试剂级α-淀粉酶、试剂级脂肪酶、试剂级胰蛋白酶、试剂级糜蛋白酶，试剂级消化酶中所含消化酶的活性极小)来制备鸭模拟小肠液，这样使得制备出的鸭模拟小肠液的酶学特性与实际鸭体内小肠液基本同源。