[发明专利]一种改良的农杆菌介导的小麦幼穗转化方法及其应用

权利要求书

1.一种改良的农杆菌介导的小麦幼穗转化方法，其特征在于，小麦种植后，选择合适的转化时期，所述转化时期选择在小麦抽穗前约10～15d，小麦旗叶全部抽出，叶环距2～5cm左右时；将含有目的基因的农杆菌菌液活化、重悬后注入旗叶包被的幼穗，整个幼穗注射过程可以在大田或温室中进行，无需在无菌条件下操作。

2.根据权利要求1所述的转化方法，其特征在于，所述含有目的基因农杆菌的活化与重悬后注入旗叶包被的幼穗具体操作如下：挑取YEP固体培养基平皿上带有双元载体——带有目的基因和/或选择标记基因，或共整合载体即T-DNA区含有目的基因和/或选择标记基因的根癌农杆菌单菌落，接种于含附加抗生素的YEP液体培养基中，28℃、200rpm震荡培养，经2-3次活化，当菌液OD₆₀₀至1.2左右时，4℃、7000rpm离心5分钟收集菌体，去掉上清液，用含终浓度为200μM的乙酰丁香酮的的1/2MS营养液悬浮菌体至OD₆₀₀约为0.6，加入终浓度为0.02％的Silwet L-77，即可用于转化；将重悬的菌液用注射器从顶部注入旗叶包被的幼穗处，每穗100-200μl。

3.根据权利要求1所述的转化方法在转基因小麦中的应用，其特征在于：小麦种植后，选择合适的转化时期，所述转化时期选择在小麦抽穗前约10～15d，小麦旗叶全部抽出，叶环距2～5cm左右时；将含有目的基因的农杆菌菌液活化、重悬后注入旗叶包被的幼穗，整个幼穗注射过程可以在大田或温室中进行，无需在无菌条件下操作。