[发明专利]一种齐墩果酸皂苷类成分的制备方法及其用途

说明书

技术领域

本发明属于医药、兽药技术领域，涉及一种齐墩果酸皂苷类成分3-O-α-L-吡喃鼠李糖-(1→2)[ β-D-吡喃葡萄糖-(1→4)]-α-L-吡喃阿拉伯糖 齐墩果酸皂苷的制备方法及其该成分抗肿瘤的用途，如用于肺癌、肝癌、胃癌、结肠癌、胶质瘤、乳腺癌、宫颈癌、白血病、淋巴癌等。本发明还涉及来自白头翁 (Pulsatilla chinensis (Bunge) Regel) 根茎的含有该化合物的提取物作为抗上述肿瘤的用途。 

背景技术

白头翁药材取自毛茛科白头翁属植物白头翁的干燥根，味苦，性寒。归胃、大肠经，具清热解毒，凉血止痢之功。用于热毒血痢，阴痒带下，阿米巴痢。据文献报道，白头翁中含原白头翁素（Protoanemonin）、白头翁素（Anemonin）、白头翁灵（Okinalin，C32H46O2）、白头翁英（Okinalein，C4H602）等，近年来国内外学者从白头翁属植物中分离鉴定出几十种五环三萜皂苷成分，这些皂苷主要为齐墩果烷型和羽扇豆烷型两种。白头翁属植物具有广泛的药理及生物活性，主要表现在抗肿瘤、抗炎抗菌、抗病毒、细胞凋亡、抗生物酶、杀虫、杀精等作用。 

经过反复研究发现，白头翁的水提液、醇提液及其碱水解产物均具有抗肿瘤活性，尤其是碱水解产物，活性更强，经过进一步成分分析研究，发现其中均含有一系列的齐墩果酸皂苷类成分。 

发明内容

本发明利用现代分离技术及鉴定手段对白头翁进行系统的化学成分分离，从中分离得到一种齐墩果酸皂苷类成分：3-O-α-L-吡喃鼠李糖-(1→2)[ β-D-吡喃葡萄糖-(1→4)]-α-L-吡喃阿拉伯糖 齐墩果酸皂苷，通过体外抗肿瘤活性筛选研究，发现该化合物具有显著的抗肿瘤作用，然而，该成分在白头翁药材中的含量不高；同时研究发现，白头翁的水提物和醇提物均具有一定的抗肿瘤作用，而其碱水解产物的活性明显强于水解前，成分分析发现，碱水解后产物中3-O-α-L-吡喃鼠李糖-(1→2)[ β-D-吡喃葡萄糖-(1→4)]-α-L-吡喃阿拉伯糖 齐墩果酸皂苷的含量较水解前大大提高。白头翁药材资源丰富，水解产物活性明确，制备工艺简单易行，适合工业化大量生产，可作为制备抗肿瘤药物，具有广阔的市场前景和开发价值。 

本发明的技术方案如下： 

1、3-O-α-L-吡喃鼠李糖-(1→2)[ β-D-吡喃葡萄糖-(1→4)]-α-L-吡喃阿拉伯糖 齐墩果酸皂苷在制备抗肿瘤药物中的应用。

2、含有3-O-α-L-吡喃鼠李糖-(1→2)[ β-D-吡喃葡萄糖-(1→4)]-α-L-吡喃阿拉伯糖 齐墩果酸皂苷的白头翁提取物在制备抗肿瘤药物中的应用。 

3、3-O-α-L-吡喃鼠李糖-(1→2)[ β-D-吡喃葡萄糖-(1→4)]-α-L-吡喃阿拉伯糖 齐墩果酸皂苷在制备抗肺癌、肝癌、胃癌、结肠癌、胶质瘤、乳腺癌、宫颈癌、白血病、淋巴癌药物中的应用。 

4、含有3-O-α-L-吡喃鼠李糖-(1→2)[ β-D-吡喃葡萄糖-(1→4)]-α-L-吡喃阿拉伯糖 齐墩果酸皂苷的白头翁提取物在制备抗肺癌、肝癌、胃癌、结肠癌、胶质瘤、乳腺癌、宫颈癌、白血病、淋巴癌药物中的应用。 

5、3-O-α-L-吡喃鼠李糖-(1→2)[ β-D-吡喃葡萄糖-(1→4)]-α-L-吡喃阿拉伯糖 齐墩果酸皂苷的制备方法，包括以下步骤： 

第一步，将白头翁药材粉碎成粗粉，用水或0.1-95%乙醇浸泡0.5-2h，6-12倍量加热回流提取2-3次，每次1-3h，过滤，合并滤液。上述滤液于50-70℃减压浓缩至0.5-1.0g生药材/mL，无醇味，0-4℃冷藏过夜，析胶，滤过，即得白头翁提取物。

第二步，白头翁提取物水溶液中加入氢氧化钠溶液调到PH10-13，加热沸腾4-10小时，每30-60分钟测PH，保持在PH10-13，放冷，加盐酸溶液，调PH 3-7，离心，去沉淀，即得白头翁提取物水解液 

第三步，白头翁提取物水解液，经过D101或AB-8或ADS-17大孔树脂吸附，依次用水、30-40%乙醇、50-80%乙醇、95%乙醇洗脱，收集50-80%乙醇洗脱部分,即得BTW58组分。经抗肿瘤药理实验，证明BTW58组分为白头翁抗肿瘤有效部位。

第四步、白头翁抗肿瘤有效部位经ODS反相硅胶柱，用甲醇和水（6:4-9:1）的混合液进行梯度洗脱，梯度洗脱液依次有五组，其体积配比分别为 

第一组甲醇6份：水4份；

第二组甲醇7份：水3份；

第三组甲醇8份：水2份；