[发明专利]治疗或预防肿瘤的药物、肿瘤全细胞疫苗及其制备方法和用途

权利要求书

1.预防和/或治疗肿瘤的药物组合物，其特征在于包括如下组分：肿瘤全细胞疫苗、阳离子脂质体和编码白细胞介素-15的重组质粒。

2.根据权利要求1所述的预防和/或治疗肿瘤的药物组合物，其特征在于：所述的肿瘤全细胞疫苗为灭活的具有特异性和主动性激发生物体主动免疫机能的肿瘤细胞疫苗。

3.根据权利要求2所述的预防和/或治疗肿瘤的药物组合物，其特征在于：所述的肿瘤全细胞疫苗包含至少一种能激活生物体特异性抗肿瘤T淋巴细胞的活性成分；其中，所述的活性成分为蛋白质、多肽、脂类、蛋白质多肽复合物、DNA分子、RNA分子、肿瘤相关抗原、特异性肿瘤抗原中至少一种。

4.根据权利要求1～3任一项所述的预防和/或治疗肿瘤的药物组合物，其特征在于所述的肿瘤全细胞疫苗由下述方法制备而成：肿瘤细胞经过细胞灭活至细胞增殖活性被抑制；其中，所述的肿瘤细胞为能特异性的诱导、激活机体主动免疫，增强生物体预防肿瘤和抗肿瘤免疫的自体细胞、同源细胞系细胞或具有交叉抗原的异体肿瘤细胞。

5.根据权利要求4所述的预防和/或治疗肿瘤的药物组合物，其特征在于：所述的肿瘤细胞为肺癌细胞、肠癌细胞、肝癌细胞、乳腺癌细胞、胃癌细胞、肾癌细胞、鼻咽癌细胞、皮肤癌细胞、食道癌细胞、黑色素瘤细胞中至少一种。

6.根据权利要求4或5所述的预防和/或治疗肿瘤的药物组合物，其特征在于：细胞灭活的方法为微波细胞灭活法，电磁波细胞灭活法，激光细胞灭活法，高温细胞灭活法，超声破碎细胞灭活法，反复细胞冻融、匀浆、离心、沉淀细胞灭活法，酶学消化细胞灭活法中至少一种。

7.根据权利要求1～6任一项所述的预防和/或治疗肿瘤的药物组合物，其特征在于：所述的阳离子脂质体为DOTAP、DOTMA、DOSPA、DOGS中至少一种；阳离子脂质体和IL-15重组质粒DNA的重量配比为1～15∶1，所述的阳离子脂质体和IL-15重组质粒DNA的重量配比优选为3∶1。

8.根据权利要求1～7任一项所述的治疗或预防肿瘤的药物，其特征在于：所述的IL-15重组质粒DNA包括：

1)、根据编码IL-15的基因构建的重组质粒DNA；或

2)、根据编码IL-15的基因序列中经过取代、缺失或添加一个或几个核苷酸且具有IL-15基因功能的基因构建的重组质粒DNA；或

3)、在生物体内被吸收转染后能分泌具有IL-15生物活性的质粒。

9.根据权利要求1～8任一项所述的治疗或预防肿瘤的药物，其特征在于：所述的治疗或预防肿瘤的药物的制剂为试剂盒，其包括包装在空间独立的制剂单元中的顺序给药的肿瘤全细胞疫苗、阳离子脂质体和编码白细胞介素-15的重组质粒。

10.权利要求1～9任一项所述的药物在制备治疗或预防肿瘤的药物中的用途。

11.更具权利要求9所述的用途，其特征在于：所述药物中的肿瘤全细胞疫苗皮下注射肿瘤疫苗数目为1×10⁵～1×10⁸个/次。

12.制备肿瘤全细胞疫苗的方法，其特征在于包括如下步骤：

a、取肿瘤细胞，经胰酶或EDTA消化、分离，得到细胞沉淀；

b、a步骤所得细胞沉淀灭活至细胞增殖活性被抑制。

13.根据权利要求12所述的制备肿瘤全细胞疫苗的方法，其特征在于：a步骤中所述的肿瘤细胞的来源为肿瘤细胞株或细胞系，或来源于生物体的肿瘤组织；其中，

当肿瘤细胞的来源为肿瘤细胞株或细胞系时，按如下方法准备肿瘤细胞：取状态良好、处于对数生长期的肿瘤细胞进行培养传代，达到所需细胞数后进入肿瘤全细胞疫苗制备程序；

当肿瘤细胞的来源为生物体的肿瘤组织时，按如下方法准备肿瘤细胞：在无菌条件下取肿瘤新鲜、血供好的未坏死部分，放入盛有含小牛或胎牛血清的DMEM/F12中在4℃下保存，用含青霉素、链霉素的PBS溶液清洗，通过酶消化法、差速贴壁法或差速消化法分离得到纯化的肿瘤细胞，将纯化的肿瘤细胞移入含小牛或胎牛血清的DMEM等培养基的培养瓶中，然后放入37℃，5％CO₂恒温培养箱培养，2～3d后，细胞铺满瓶底80～90％时传代，达到所需细胞数后进入肿瘤全细胞疫苗制备程序。