[发明专利]治疗或预防肿瘤的药物、肿瘤全细胞疫苗及其制备方法和用途

说明书

技术领域

本发明涉及治疗或预防肿瘤的药物、肿瘤全细胞疫苗(Whole-cell vaccine；Whole cell vaccine)及其制备方法和用途，属于生物工程领域和生物免疫学领域。

背景技术

恶性肿瘤具有多种免疫逃逸机制，包括肿瘤细胞抗原特异性低和/或肿瘤抗原破坏、或缺乏一些免疫辅助因子的表达等，使得现有肿瘤疫苗的临床治疗效果不佳。此外在肿瘤的进展期，肿瘤细胞具有高度异质性，极易发生突变而逃避免疫系统的监督，突变导致肿瘤抗原表型消失，继而也使针对该抗原的免疫治疗效果降低。为了使肿瘤疫苗疗效实现最优化，常采用细胞因子(如IL-12，GM-CSF)等作为佐剂以增强免疫效应。白细胞介素15(IL-15)是近年发现的一个重要的诱导抗肿瘤免疫反应的细胞因子，参与对多种组织细胞的调节，是目前机体免疫功能调节的研究新热点。但是未见有以IL-15作为疫苗佐剂使用的报道。

发明内容

本发明所要解决的第一个技术问题是提供一种预防和/或治疗肿瘤的药物组合物。

本发明预防和/或治疗肿瘤的药物组合物包括如下组分：肿瘤全细胞疫苗(Whole-cell vaccine；Whole cell vaccine)、阳离子脂质体(Liposome)和编码白细胞介素-15(Interleukin 15，IL-15)的重组质粒。

其中，所述的肿瘤全细胞疫苗优选为灭活的具有特异性和主动性激发生物体主动免疫机能的肿瘤细胞疫苗。

进一步的，所述的肿瘤全细胞疫苗包含至少一种能激活生物体特异性抗肿瘤T淋巴细胞的活性成分；其中，所述的活性成分为蛋白质、多肽、脂类、蛋白质多肽复合物、DNA分子、RNA分子、肿瘤相关抗原、特异性肿瘤抗原中至少一种。

其中，本发明预防和/或治疗肿瘤的药物组合物中所述的肿瘤全细胞疫苗优选由下述方法制备而成：肿瘤细胞经过细胞灭活至细胞增殖活性被抑制；其中，所述的肿瘤细胞为能特异性的诱导、激活机体主动免疫，增强生物体预防肿瘤和抗肿瘤免疫的自体细胞、同源细胞系细胞或具有交叉抗原的异体肿瘤细胞。包括良性、恶性肿瘤，可为原发性或者继发性甚至转移的肿瘤细胞。其组织来源可为上皮组织、间叶组织、血液组织等。所述的肿瘤细胞可以为肺癌细胞、肠癌细胞、肝癌细胞、乳腺癌细胞、胃癌细胞、肾癌细胞、鼻咽癌细胞、皮肤癌细胞、食道癌细胞、黑色素瘤细胞中至少一种。

进一步的，上述的细胞灭活可以采用如下方法：微波细胞灭活法，电磁波细胞灭活法，激光细胞灭活法，高温细胞灭活法，超声破碎细胞灭活法，反复细胞冻融、匀浆、离心、沉淀细胞灭活法，酶学消化细胞灭活法中至少一种。

其中，本发明药物中的阳离子脂质体和编码白细胞介素-15的重组质粒可以作为疫苗佐剂使用。

其中，本发明预防和/或治疗肿瘤的药物组合物，所述的阳离子脂质体为双链季铵盐型表面活性剂，如：DOTAP(N-[1-(2，3-dioleoyloxy)propyl]-N，N，N-trimethylammonium methylsulfate；1，2-二油酰氧丙基-N，N，N-三甲基溴化铵)、DOTMA(N-[1-(2，3-二油酰氧基)丙基]-N，N，N-三甲基氯化铵)、DOSPA(3-二油酰氧-N-[2(精胺羧基酰胺)乙基]-N，N-二甲基-1-丙基-三氟乙酸铵)或DOGS(双十八烷基酰胺甘氨酰精胺)中至少一种；阳离子脂质体和IL-15重组质粒DNA的重量配比优选为1～15∶1，所述的阳离子脂质体和IL-15重组质粒DNA的重量配比更优选为3∶1。

其中，本发明治疗或预防肿瘤的药物，所述的LI-15重组质粒DNA包括：

1)、根据编码IL-15的基因构建的重组质粒DNA；或

2)、根据编码LI-15的基因序列中经过取代、缺失或添加一个或几个核苷酸且具有IL-15基因功能的基因构建的重组质粒DNA；或

3)、在生物体内被吸收转染后能分泌具有IL-15生物活性的质粒。

其中，上述的治疗或预防肿瘤的药物的制剂优选为试剂盒，其包括包装在空间独立的制剂单元中的顺序给药的肿瘤全细胞疫苗、阳离子脂质体和编码白细胞介素-15的重组质粒。进一步的，为了使本发明药物治疗或预防肿瘤的效果最好，本发明药物使用时将脂质体和IL-15重组质粒按照比例混合，以无沉淀为标准。皮下注射、肿瘤内部或瘤周注射、淋巴结内或周围注射等使用时，肿瘤全细胞疫苗先单独注射使用，后将脂质体与质粒的混合物注射，不混合在一起注射使用。还可视具体情况与已诱导的致敏T淋巴细胞、B-7、GM-CSF、γ-干扰素(INFγ)等联合使用。