[发明专利]一种促进切割取样胚胎冷冻解冻后体外发育的方法无效
| 申请号： | 201110142918.6 | 申请日： | 2011-05-30 |
| 公开（公告）号： | CN102250833A | 公开（公告）日： | 2011-11-23 |
| 发明（设计）人： | 刘国世;李树静;田秀芝;高超;张洪海 | 申请（专利权）人： | 中国农业大学 |
| 主分类号： | C12N5/073 | 分类号： | C12N5/073;C12Q1/68 |
| 代理公司： | 北京路浩知识产权代理有限公司 11002 | 代理人： | 王加岭;张庆敏 |
| 地址： | 100193 *** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 促进 切割 取样 胚胎 冷冻 解冻 体外 发育 方法 | ||
1.一种促进切割取样胚胎冷冻解冻后体外发育的方法，其特征在于，其是将切割取细胞样进行性别鉴定后的胚胎冷冻解冻后在含褪黑素的培养液中进行体外培养；
其中，所述培养液为CR1aa液，培养液中褪黑素的浓度为10-9～10-3mol/L。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，培养液中褪黑素的浓度为10-7～10-3mol/L。
3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，培养液中褪黑素的浓度为10-3mol/L。
4.根据权利要求1-3任一项所述的方法，其特征在于，性别鉴定的步骤为：以切取的胚胎细胞样品为模板，利用巢式PCR反应进行扩增，电泳检测PCR扩增产物，根据样品扩增结果来鉴定胚胎的性别。
5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，PCR扩增使用的引物为：
引物1：5′-TGATAGTTGATCCCACAGAAGG-3′，
5′-TGAACTTACAAGCAGCTGAGG-3′，
引物2：5′-TGAGGCATGGAACTCCGCTTG-3′，
5′-GGTGGTTCCACATTCCGTAGG-3′。
6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，PCR反应条件为：94℃预变性5min；94℃变性30s；53℃退火25s；72℃延伸30s，共进行30个循环；最后在72℃延伸5min。
7.根据权利要求1-3任一项所述的方法，其特征在于，培养时间为2.5～3h。
8.根据权利要求1-3任一项所述的方法，其特征在于，所述胚胎来源于牛胚胎。
9.根据权利要求1-3任一项所述的方法，其特征在于，所述胚胎为用于性别鉴定切割取样后的牛囊胚。
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