[发明专利]重组黑曲霉单宁酶及其表达和纯化方法有效
| 申请号： | 201110143632.X | 申请日： | 2011-05-31 |
| 公开（公告）号： | CN102260656A | 公开（公告）日： | 2011-11-30 |
| 发明（设计）人： | 乔家运;陈龙宾;李平;王文杰 | 申请（专利权）人： | 天津市畜牧兽医研究所 |
| 主分类号： | C12N9/18 | 分类号： | C12N9/18;C12N15/55;C12N15/70;A23K1/165 |
| 代理公司： | 天津市杰盈专利代理有限公司 12207 | 代理人： | 朱红星 |
| 地址： | 300112 天津市*** | 国省代码： | 天津;12 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 重组 曲霉 单宁 及其 表达 纯化 方法 | ||
【权利要求书】：
1. 一种重组表达的黑曲霉单宁酶，其特征在于黑曲霉单宁酶编码的基因核苷酸序列如图1所示；其所对应的氨基酸序列如图2所示。
2.权利要求1所述黑曲霉单宁酶的表达方法，其特征在于通过表达载体pET32a-Tan在大肠杆菌菌株BL21中采用IPTG进行诱导表达，采用裂解法释放单宁酶后进行纯化得到重组黑曲霉单宁酶。
3.权利要求2所述黑曲霉单宁酶的表达方法，其中所述的纯化为：采用5 mL Ni-NTA柱纯化蛋白，50 mL NPI-10平衡柱子，流速为5 mL/min；加入蛋白粗提物，流速为2 mL/min，50 mL NPI-20洗脱杂蛋白，流速为5 mL/min，30 mL NPI-250洗脱单宁酶蛋白，流速为1 mL/min，收集各步洗脱液，SDS-PAGE分析蛋白纯化情况。
4.权利要求1所述重组表达的黑曲霉单宁酶在作为降解植物性饲料中的单宁，降低对单胃动物体内胰蛋白酶、淀粉酶消化酶的抑制，提高饲料中营养物质消化率饲料方面的应用。
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