[发明专利]一种结核分枝杆菌ESAT-6-F2融合蛋白亚单位疫苗及其制备方法无效
申请号: | 201110144002.4 | 申请日: | 2011-05-31 |
公开(公告)号: | CN102210859A | 公开(公告)日: | 2011-10-12 |
发明(设计)人: | 井申荣;岳婷婷;曾韦锟;黄芬 | 申请(专利权)人: | 昆明理工大学 |
主分类号: | A61K39/295 | 分类号: | A61K39/295;C12N15/52;C12N15/63;C12N15/70;C12N1/21;C07K19/00;A61P31/06;A61P31/14;A61K39/04;A61K39/155;C12R1/19 |
代理公司: | 暂无信息 | 代理人: | 暂无信息 |
地址: | 650093 云*** | 国省代码: | 云南;53 |
权利要求书: | 查看更多 | 说明书: | 查看更多 |
摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 结核 分枝杆菌 esat f2 融合 蛋白 单位 疫苗 及其 制备 方法 | ||
1.一种结核分枝杆菌ESAT-6-F2融合蛋白亚单位疫苗,其特征在于融合蛋白碱基序列如序列表SEQ ID NO.1所述,氨基酸序列如SEQ ID NO.2所述。
2.一种权利要求1所述的结核分枝杆菌ESAT-6-F2融合蛋白亚单位疫苗的制备方法,其特征包括以下具体步骤:
(1)重组亚克隆载体ESAT-6-F2/pMD18T的构建
以结核分枝杆菌标准菌株H37Rv全基因组为模板,PCR扩增获得ESAT-6基因;以f/pMD18T质粒为模板,PCR扩增获得F2基因,以ESAT-6和F2基因为模板,PCR扩增获得ESAT-6-F2基因,并引入NdeⅠ和XhoⅠ酶切位点和6×His标签,扩增产物胶回收纯化后与pMD18T载体连接,获得重组亚克隆载体;ESAT-6-F2基因是由ESAT-6和F2基因以linker连接,碱基序列如SEQ ID NO.1所示;
(2)重组表达载体ESAT-6-F2/pET30a的构建
ESAT-6-F2/pMD18T质粒经NdeⅠ和XhoⅠ双酶切后得到带有粘性末端的目的基因ESAT-6-F2,并与同样双酶切过的表达载体pET30a相连接,形成重组表达载体ESAT-6-F2/pET30a;
(3)重组工程菌的制备
重组表达载体ESAT-6-F2/pET30a,转化到大肠杆菌表达菌株中,得到含ESAT-6-F2基因的重组工程菌;
(4)ESAT-6-F2蛋白的表达
将重组工程菌经过发酵培养,IPTG诱导表达ESAT-6-F2融合蛋白,离心收集菌体破菌,再离心,最后通过金属离子亲和层析纯化法,4℃下,采用梯度透析复性的方法对已纯化好变性蛋白复性即得到ESAT-6-F2融合蛋白;利用纯化的ESAT-6-F2融合蛋白,辅以佐剂,制备结核分枝杆菌ESAT-6-F2融合蛋白亚单位疫苗。
3.根据权利要求2所述的制备方法,其特征在于:大肠杆菌表达载体为质粒pET30a及其适用于大肠杆菌系统的pET系列表达载体。
4.根据权利要求3所述的制备方法,其特征在于:大肠杆菌表达菌株为E.coliBL21(DE3)、E.coliBL21(DE3) pLys、Origami或Rosetta。
5.根据权利要求4所述的制备方法,其特征在于:转化大肠杆菌表达菌株的方法为热休克
转化法,电转化法或原生质体转化法。
6.根据权利要求5所述的制备方法,其特征在于:金属离子亲和层析纯化法为镍离子亲和层析纯化法。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息,商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于昆明理工大学,未经昆明理工大学许可,擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作,请联系【客服】
本文链接:http://www.vipzhuanli.com/pat/books/201110144002.4/1.html,转载请声明来源钻瓜专利网。