[发明专利]利用农杆菌对棉花种子胚进行直接转化的方法

权利要求书

1.培育转基因棉花的方法，通过根癌农杆菌介导将目的DNA转入棉花细胞，其特征在于，所述方法包括以下步骤：

1)将含有目的DNA的重组根癌农杆菌接种到已去掉种皮并划伤的棉花种子胚的损伤切面，然后将接种后的棉花种子胚进行共培养使所述重组根癌农杆菌的T-DNA与棉花的染色体整合；

2)将经过步骤1)共培养的种子胚直接接种于长苗培养基中培养即得到具有根、茎和子叶的幼苗。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述将含有目的DNA的重组根癌农杆菌接种到已去掉种皮并划伤的棉花种子胚的损伤切面，按照包括如下步骤的方法进行：将已去掉种皮并划伤的棉花种子胚在所述重组根癌农杆菌菌液中浸泡10～15分钟，如10分钟；所述重组根癌农杆菌菌液的OD₆₀₀为0.3～0.4，如0.3。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于：所述共培养的时间为48～72小时，如48小时。

4.根据权利要求1-3中任一所述的方法，其特征在于：所述共培养的温度为20～30℃，如25℃。

5.根据权利要求1-4中任一所述的方法，其特征在于：所述共培养中使用的培养基中含乙酰丁香酮50-200μmol/L。

6.根据权利要求1-5中任一所述的方法，其特征在于：所述重组根癌农杆菌菌液中含有乙酰丁香酮50-200μmol/L。

7.根据权利要求1-6中任一所述的方法，其特征在于：所述重组根癌农杆菌菌液中含有乙酰丁香酮为100-150μmol/L或100μmol/L，共培养使用的培养基中含乙酰丁香酮100-150μmol/L或100μmol/L。

8.根据权利要求1-7中任一所述的方法，其特征在于：步骤1)所述的共培养使用的基础培养基为MS，步骤2)所述的长苗培养基的基础培养基为MS。

9.根据权利要求1-8中任一所述的方法，其特征在于：步骤2)所述的长苗培养基中无筛选转化体的选择压力。

10.根据权利要求1-9中任一所述的方法，其特征在于：所述方法中不包括形成愈伤组织的步骤。