[发明专利]一种仔稚鱼快速分类鉴定方法有效
| 申请号： | 201110145486.4 | 申请日： | 2011-06-01 |
| 公开（公告）号： | CN102229997A | 公开（公告）日： | 2011-11-02 |
| 发明（设计）人： | 刘凯;施炜纲;张敏莹;段金荣;周彦锋;徐东坡 | 申请（专利权）人： | 中国水产科学研究院淡水渔业研究中心 |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68 |
| 代理公司： | 南京经纬专利商标代理有限公司 32200 | 代理人： | 楼高潮 |
| 地址： | 214000 江*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 仔稚鱼 快速 分类 鉴定 方法 | ||
1.一种仔稚鱼快速分类鉴定方法，包括以下步骤：
（1）在调查水域采集可以准确分类鉴定的鱼类样本，提取样本DNA，通过对特 征片段进行扩增、测序，获得相应序列，从而建立该水域鱼类DNA指纹库；
（2）在调查水域采集仔稚鱼样本，提取样本DNA，对特征片段进行PCR扩增、测序；
（3）将获得的仔稚鱼特征片段序列与事先建立的DNA指纹库进行比对，判断仔稚鱼种类。
2.根据权利要求1所述的一种仔稚鱼快速分类鉴定方法，其特征在于：步骤（1）中所述DNA提取方法为：取背部新鲜肌肉，用70%乙醇固定，蛋白酶K消化，酚-仿常规方法抽提DNA，-20℃保存备用。
3.根据权利要求1所述的一种仔稚鱼快速分类鉴定方法，其特征在于：所述的特征片段为线粒体16S rRNA。
4.根据权利要求1所述的一种仔稚鱼快速分类鉴定方法，其特征在于：所述特征片段通用扩增引物为：
Forward primer：TCGCCTGTTTACCAAAAACATCGCCT；
Reverse primer：AACCCTTAATAGCGGCTGCACCATT。
5.根据权利要求1所述的一种仔稚鱼快速分类鉴定方法，其特征在于：所述的PCR扩增的反应体系为：94℃预变性2分钟；每一循环94℃ 1分钟，57℃ 30秒，72℃ 1分钟；共35个循环，最后72℃延伸8分钟；PCR产物经1%琼脂糖凝胶电泳检测后，利用glassmilk纯化试剂盒回收，测序。
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