[发明专利]鉴别结核和非结核分枝杆菌的试剂盒及其使用方法

权利要求书

1.一种鉴别结核和非结核分枝杆菌的试剂盒，包括对待测菌株进行PCR扩增的引物和荧光定量检测的探针，其特征在于，所述引物为上游引物MF1和下游引物MR1或上游引物MF2和下游引物MR2，所述引物能与分枝杆菌的特异片段结合，所述用于检测分枝杆菌设计的探针1其序列为M1、M2、M3中的任意一个，用于检测结核分枝杆菌设计的探针2序列为T1、T2、T3中的任意一个，所述探针1和探针2的3’端带有淬灭物质，所述探针1和探针2的5’端的荧光物质不同，

所述上游引物MF1的核苷酸序列为序列表中的序列1；

所述下游引物MR1的核苷酸序列为序列表中的序列2；

所述上游引物MF2的核苷酸序列为序列表中的序列3；

所述下游引物MR2的核苷酸序列为序列表中的序列4；

所述探针M1的核苷酸序列为序列表中的序列5；

所述探针M2的核苷酸序列为序列表中的序列6；

所述探针M3的核苷酸序列为序列表中的序列7；

所述探针T1的核苷酸序列为序列表中的序列8；

所述探针T2的核苷酸序列为序列表中的序列9；

所述探针T3的核苷酸序列为序列表中的序列10。

2.根据权利要求1所述鉴别结核和非结核分枝杆菌的试剂盒，其特征在于，所述引物为上游引物MF1和下游引物MR1，所述用于检测分枝杆菌属设计的探针为探针M3，用于检测结核分枝杆菌设计的探针为探针T3。

3.根据权利要求2所述鉴别结核和非结核分枝杆菌的试剂盒，其特征在于，所述探针1的5’端标记HEX，探针2的5’端标记荧光物质FAM，探针1和探针2的3’端都是标记淬灭物质BHQ。

4.根据权利要求1所述鉴别结核和非结核分枝杆菌的试剂盒，其特征在于，所述特异片段为16S rRNA和23S rRNA之间的插入序列(ITS序列)的变异区，所述16S rRNA和23S rRNA为分枝杆菌和非结核分枝杆菌按沉降系数分类的rRNA。

5.一种鉴别结核和非结核分枝杆菌的方法，其特征在于，包括以下步骤：用权利要求1至4中任一项所述的鉴别结核和非结核分枝杆菌的试剂盒，对待测菌株的核酸进行荧光定量PCR扩增，检测所得到的PCR产物的荧光信号；如果同时检测到探针1和探针2的荧光信号，则待测菌为结核分枝杆菌；如果能检测到探针1的荧光信号，而不能检测到探针2的荧光信号，则待测菌为非结核分枝杆菌。