[发明专利]条件表达猪IκBα基因野生型和突变型的DNA片段

权利要求书

1.一种表达盒，为双链DNA，自上游至下游依次包括如下元件：启动子、Loxp序列、IκBα蛋白的编码基因、终止序列甲、筛选基因、所述Loxp序列、mIκBα蛋白的编码基因和终止序列乙；所述IκBα蛋白如序列表的序列14所示；所述mIκBα蛋白如序列表的序列15所示。

2.如权利要求1所述的表达盒，其特征在于：所述IκBα蛋白的编码基因如序列表的序列1自5’末端第741至1817位核苷酸所示；所述mIκBα蛋白的编码基因如序列表的序列1自5’末端第5125至6201位核苷酸所示；所述Loxp序列如序列表的序列1自5’末端第700至733位核苷酸所示；所述终止序列甲和所述终止序列乙为序列表的序列1自5’末端第1840至2067位核苷酸所示的pA终止序列。

3.如权利要求1或2所述的表达盒，其特征在于：所述启动子为序列表的序列1自5’末端第33至693位核苷酸所示的CMV启动子；所述筛选基因为序列表的序列1自5’末端第2088至5071位核苷酸所示的TKneo片段的编码基因。

4.如权利要求3所述的表达盒，其特征在于：所述表达盒为如下(a)或(b)：

(a)序列表的序列1自5’末端第33至6451位核苷酸所示的DNA；

(b)序列表的序列1所示的DNA。

5.含有权利要求1至4中任一所述表达盒的重组表达载体。

6.如权利要求6所述的重组表达载体，其特征在于：所述重组表达载体为如下(c)或(d)：

(c)在重组质粒pUC19-2的Not I和Cla I酶切位点之间插入所述表达盒得到的重组质粒；所述重组质粒pUC19-2是将酶切识别序列乙插入重组质粒pUC19-1的EcoRI和BamH I酶切位点之间得到的重组质粒；所述重组质粒pUC19-1是将酶切识别序列甲插入pUC19载体的BamH I和HindIII酶切位点之间得到的重组质粒；所述酶切识别序列甲为将序列表的序列7所示的单链DNA和序列表的序列9所示的单链DNA经过变性和退火得到的双链DNA；所述酶切识别序列乙为将序列表的序列10所示的单链DNA和序列表的序列12所示的单链DNA经过变性和退火得到的双链DNA；

(d)在pUC19载体的多克隆位点插入所述表达盒得到的重组质粒。

7.含有权利要求5或6所述重组表达载体的转基因细胞系。

8.权利要求5或6所述重组表达载体或权利要求7所述转基因细胞系在表达所述IκBα蛋白的编码基因或所述mIκBα蛋白的编码基因中的应用。

9.一种IκBα蛋白的编码基因或mIκBα蛋白的编码基因的条件表达系统，包括如下(e)或(f)：

(e)权利要求5或6所述重组表达载体和辅助质粒；

(f)权利要求7所述转基因细胞系和所述辅助质粒；

所述辅助质粒为可以表达Cre重组酶的质粒；所述Cre重组酶为如下(g)或(h)：

(g)由序列表中序列13所示的氨基酸序列组成的蛋白质；

(h)将序列13的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且具有相同功能的由序列13衍生的蛋白质；

所述IκBα蛋白如序列表的序列14所示；所述mIκBα蛋白如序列表的序列15所示。

10.如权利要求9所述的条件表达系统，其特征在于：所述IκBα蛋白的编码基因如序列表的序列1自5’末端第741至1817位核苷酸所示；所述mIκBα蛋白的编码基因如序列表的序列1自5’末端第5125至6201位核苷酸所示；所述(f)中，所述转基因细胞系的宿主细胞为离体的哺乳动物细胞系，优选为细胞系PIEC；所述(e)和所述(f)中，所述辅助质粒为质粒pOG231。