[发明专利]一种不含基因组DNA的总RNA制备方法

权利要求书

1.一种不含基因组DNA的总RNA制备方法，包括以下步骤：

a)使用重悬液重悬需要提取的生物材料；

b)加入与重悬液体积相同的十二烷基硫酸钠溶液，室温裂解3-5分钟，或65度裂解0.5-1分钟；

c)加入酸性醋酸钾溶液，离心，去除出现的沉淀，取上清，醋酸钾和十二烷基硫酸钠溶液摩尔比值为1∶0.9-1.1；

d)将c)步骤所得上清加入酸性醋酸钾溶液，硫氰酸胍贮液，使醋酸钾终浓度为1mol/L，硫氰酸胍为1.5mol/L；离心5-10分钟，取上清；

e)将d)步骤所得的上清加入离心式硅胶柱，离心；收集穿过液，在穿过液中加入无水乙醇，混匀后，-20℃静置10-15分钟，离心10-15分钟，弃上清。

f)将所得RNA沉淀用洗涤液洗涤两次，空气中10-15分钟晾干，然后加入超纯水溶解，即可。

2.根据权利要求1所述的、一种不含基因组DNA的总RNA制备方法，其特征在于：所述的重悬液为50±10mmol/L葡萄糖和10±2mmol/L乙二酸四乙酸钠(EDTA)的混合溶液。

3.根据权利要求1所述的、一种不含基因组DNA的总RNA制备方法，其特征在于：所述的生物材料为细菌菌体，菌体与重悬液的质量/体积比为20-50mg/100μL。

4.根据权利要求1所述的、一种不含基因组DNA的总RNA制备方法，其特征在于：所述的十二烷基硫酸钠溶液液的重量浓度为2±0.2％。

5.根据权利要求1所述的、一种不含基因组DNA的总RNA制备方法，其特征在于：所述的酸性醋酸钾溶液包含3±0.2mol/L醋酸钾和6.5±0.4mol/L醋酸，pH为5.0±0.05。 

6.根据权利要求1所述的、一种不含基因组DNA的总RNA制备方法，其特征在于：所述的硫氰酸胍贮液浓度为4.5±0.1mol/L。

7.根据权利要求1所述的、一种不含基因组DNA的总RNA制备方法，其特征在于：所述的洗涤液包含70±5％乙醇，50±5mmol/L醋酸钠，pH 5.2±0.05的混合溶液。