[发明专利]具有谷氨酰胺合成酶功能的基因、其编码蛋白及其克隆方法

权利要求书

1.一种具有谷氨酰胺合成酶功能的基因，其特征在于该基因为SEQ ID NO 1 所示的碱基序列。

2.一种根据权利要求1所述的具有谷氨酰胺合成酶功能的基因的编码蛋白，该蛋白为SEQ ID NO 2 所示的氨基酸序列。

3.一种根据权利要求1所述的具有谷氨酰胺合成酶功能的基因的克隆方法，其特征在于该方法的具体步骤为：利用SMART^TM cDNA construction kit构建了3个盐藻cDNA文库，通过对该3个文库中cDNA序列的测序，获得对应的EST文库；再通过序列比对，分离到了一个谷氨酰胺合成酶基因；挑选cDNA文库相应克隆进行测序，获得了含有该基因完整ORF的cDNA序列。

4.根据权利要求3所述的克隆方法，其特征在于所述的建立3个盐藻cDNA文库的具体步骤为：取液氮冻存的盐藻样品，抽提不同盐藻样品的总RNA，通过甲醛变性电泳检测不同总RNA样品的质量，之后用紫外分光光度计测定混合后总RNA的OD260及OD260/OD280的值,计算总RNA的浓度及纯度；随后采用SMART^TM cDNA library construction kit进行盐藻全长cDNA的合成，接着利用TRIMMER-DIRECT cDNA Normalization Kit对盐藻全长cDNA进行均一化处理；将制备好的pBluescript SK-载体和cDNA片段按1: 5的摩尔比在25 μL体系中 ，于14℃下连接过夜；连接物经脱盐后，进行电激转化；然后，将所有转化物混合，即得到盐藻的全长、均一化cDNA文库。

5.一种重组表达载体，该重组载体含有上述的基因。

6.一种宿主细胞，该宿主细胞含有上述的重组载体。

7.一种根据权利要求1所述的具有谷氨酰胺合成酶功能的基因在低氮环境下提高生物氮利用效率方面的应用。

8.一种根据权利要求2所述的DvGS1基因编码的蛋白在低氮环境下提高生物氮利用效率方面的应用。