[发明专利]一种月季花托愈伤组织的诱导方法

说明书

技术领域

本发明属于植物组织培养技术领域，具体涉及一种月季花托愈伤组织的诱导方法。

背景技术

月季(Rosa hybrida L.)是我国最重要的园林植物之一。作为大地景观绿化的重要材料，月季在鲜切花生产与应用中也占有重要位置。在一些重要的观赏植物如兰花上，组织培养技术已开始应用，并大规模商品化生产，同时利用转基因技术向棉花等作物中导入目的基因已经培育出转基因新品系，这为利用转基因技术获得抗逆性强、花色特异的月季新品系提供了可能。自上世纪90年代以来月季组织培养的研究在国内外蓬勃开展，但是至今未能获得根本性的突破。研究表明月季组培苗形成途径主要以愈伤组织脱分化为主，而愈伤组织的质量是脱分化的基础。过氧化物酶是植物体内重要的呼吸酶类，其活性高低与酚类物质代谢、植物抗性密切相关，也有可能与愈伤组织的形成有关。月季体内由于存在较高的过氧化物酶含量，存在愈伤组织较难诱导、诱导率低，形成的愈伤组织质量差等问题，导致月季愈伤组织诱导与再生的研究进展缓慢。截至目前，以月季的叶片、叶柄、茎段为外植体进行愈伤组织的诱导取得了一些定的进展，但在离体诱导月季花托愈伤组织方面尚未见报道，因此，以花托为外植体，提高月季愈伤组织诱导率及诱导质量，将在很大程度上促进月季产业的发展，带来巨大的经济效益。

发明内容

本发明是为了克服现有技术的不足，建立一种月季花托愈伤组织的诱导方法，提高月季愈伤组织的诱导率及诱导质量，为深入开展月季生物技术育种研究提供一种新的技术平台。

本发明所采用的技术方案如下：

首先，选取适合的月季花托外植体，进行预处理及常规消毒；然后，对外植体进行初始愈伤组织的诱导，获得初始愈伤组织；最后，对初始愈伤组织进行增殖培养，以达到使愈伤组织快速增殖的目的。

本发明所述月季花托愈伤组织的诱导方法具体包括如下步骤：

1)花托外植体的选取与消毒：选取直径为0.4～0.6cm的花蕾，4℃冰箱预处理1～3d后，常规消毒，剥取无菌花托；

2)启动培养：将所述无菌花托在启动培养基上进行暗培养7d，然后转至弱光下培养30～50d，产生初始愈伤组织；其中：所述暗培养的培养温度为25±1℃；所述弱光下培养的培养条件为：培养温度25±1℃，光照14h/d，光照强度800～1000Lx；所述启动培养基为MS+2，4-D 4～5.5mg/L+6-BA 0～0.5mg/L；

3)增殖培养：将所述初始培养获得的愈伤组织，转接到增殖培养基中进行增殖培养；所述增殖培养基为MS+2，4-D 2.0～3.0mg/L+6-BA 0.1～0.3mg/L+NAA 1.5～2.5mg/L；培养条件为：培养温度25±1℃，光照14h/d，光照强度1500Lx；。

作为一种优选方案，所述步骤2)中，所述启动培养基为MS+2，4-D 5.0mg/L+6-BA 0.5mg/L。

作为一种优选方案，所述步骤3)中，所述增殖培养基为MS+2，4-D 2.0mg/L+6-BA 0.2mg/L+NAA 2.0mg/L。

上述各种培养基，均以MS为基本培养基，含琼脂5.4g/L、蔗糖30g/L，培养基灭菌前pH为5.8～6.0。

本发明的有益效果在于：采用本发明所述方法，可快速获得大量花托愈伤组织，诱导率高达100％，从而攻克了月季愈伤组织诱导率低、诱导质量差这一技术难题，为月季品种改良和生物技术育种奠定了良好的基础。

附图说明

图1为月季花托在启动培养基上获得的初始愈伤组织。

具体实施方式

以下实施例用来说明本发明，但不用来限制本发明的保护范围。

以下各实施例中，实验材料均为月季“粉和平”和“红帽子”’，两种月季品种的实验结果一致。基本培养基为MS，含琼脂5.4g/L，蔗糖30g/L，培养基灭菌前pH为5.8～6.0。培养条件为(另有说明的除外)：培养温度25±1℃，光照14h/d，光照强度1500Lx。

实施例1花托外植体的选取与消毒

在4～10月份，选取田间直径为0.4～0.6cm、含苞欲放的月季花蕾，4℃冰箱预处理1～2d，流水冲洗1～2h，超净工作台上将花蕾放入70％乙醇30s，再转入0.1％HgCl₂溶液中8min，无菌水冲洗3～4次，剥去花萼、花瓣、雄蕊群及雌蕊群，取下花托切成4块备用。

实施例2：启动培养中不同浓度2，4-D和6-BA组合对愈伤组织诱导的影响