[发明专利]一种定量检测炭疽芽孢的磁性免疫层析试纸条及制备方法

说明书

技术领域

本发明属于感染性疾病检测技术领域。特别是涉及到一种定量检测样品中炭疽芽孢的磁性免疫层析试纸条，同时还涉及一种定量检测样品中炭疽芽孢的磁性免疫层析试纸条的制备方法。

背景技术

炭疽芽孢杆菌(Bacillus an thracis)是一种可产生芽孢的需氧杆菌，竹节状排列，为革兰氏阳性。该菌可引起人畜共患的炭疽病，且在草食性动物中发病率最高，人类通过接触土壤中，皮毛上的芽孢也可导致感染。由于炭疽芽孢对高温，高压，干燥、电离辐射以及一些化学物质具有极强的抵抗能力，故而可在环境中生存数十年，甚至数百年。为此，炭疽芽孢一直被列为头号生物战斗剂。2001年，发生在美国的炭疽恐怖事件再次让全世界震惊，无论是自然感染还是生物反恐，在掌握炭疽芽孢杆菌致病机制的同时如何快速准确的检验、鉴定炭疽芽孢杆菌是当今人类必须要解决的难题。

针对炭疽芽孢的现有检测方法包括：利用免疫学技术的酶标法或荧光抗体染色法，利用分子生物学技术的PCR法，以及多种传统的检测方法，包括细菌分离培养、溶血性实验、荚膜染色、噬菌体裂解实验、串珠实验等。上述方法耗时较长，而且需要纯化工作或购买复杂的仪器，操作繁琐，多数只能进行定性检测而不能实验定量检测。

磁性免疫层析(Magnetic Immuno-chromatography Testing，MICT)是以胶体金技术为基础发展出的一种单人份快速定量检测技术。此免疫层析以超顺磁颗粒(superPMPs)代替传统的标记物进行免疫层析，通过超顺磁颗粒捕获的生化物质来定量判断样品中的待测物含量，采用磁标记免疫复合物-磁场强度标准曲线来进行定量测定。该技术与传统技术相比具有下述优势：a)比各类目测快速诊断法灵敏10-100倍；b)加样后30分钟内可得到数据，且可实现多重检测；c)在3到4个数量级浓度范围内呈线性；d)所用磁性检测仪器采用固相元件，微型化设计自成一体，独立运行，体积小，操作简便；e)超顺磁颗粒由聚合物包被，不会随时间而衰变。该技术继承了传统免疫层析技术简便快速、单人份操作的优点，又弥补了传统免疫层析技术灵敏度低、只能定性不能定量的缺点，从而成为替代传统免疫层析技术的首选。

磁免疫层析法是以超顺磁颗粒标记抗体进行免疫反应检测，通过检测磁性强度提供针对生物样品的定量检测数据，采用标记的免疫复合物-磁场强度的标准曲线来计算出待测物质的含量。用作标记物的超顺磁颗粒，在没有外加磁场的情况下不具有任何磁性，只有在外加磁场作用下才会表现出磁性，商品化的超顺磁颗粒都经过表面修饰，大大方便了标记过程，标记简便，重复性好。

发明内容

本发明的目的是在于提供了一种定量检测样品中炭疽芽孢的磁性免疫层析试纸条，此试纸条可实现针对炭疽芽孢的快速、定量的现场检测。

本发明的另一个目的是在于提供了一种定量检测样品中炭疽芽孢的磁性免疫层析试纸条的制备方法，采用此方法制备出的磁性免疫试纸条可用于针对炭疽芽孢的快速、定量检测，且信号稳定性强，可长期保存。

为达到上述目的，本发明采用以下技术方案：

将磁性免疫层析技术应用在炭疽芽孢定量检测试纸条中，将一株针对炭疽芽孢表面蛋白的单克隆抗体共价偶联于超顺磁颗粒上，将另一株针对炭疽芽孢表面蛋白的单克隆抗体包被于硝酸纤维素膜上作为检测线捕获固相，将羊抗小鼠IgG包被于硝酸纤维素膜上作为质控线捕获固相，按照常规免疫层析法的原理进行标本检测，结合磁性检测仪进行检测，在高灵敏度检测的同时大大缩短了检测时间，并且可以即时给出定量结果，测量仪器简单可靠，便携实用。

一种定量检测样品中炭疽芽孢的磁性免疫层析试纸条，该试纸条由98mm长的底板(millipore公司生产级底板)、25mm长的硝酸纤维素膜(millipore公司实验级135kit硝酸纤维素膜)、结合有炭疽芽孢抗体偶联的超顺磁颗粒的8mm长的结合垫(millipore公司生产级Au-pad)、22mm长的样品垫(millipore公司生产级样品垫)以及29mm长的吸收垫(millipore公司生产级吸收垫)构成，硝酸纤维素膜上预包被有炭疽芽孢检测线T和质控线C。构成该试纸条的所有部件长度不同，宽度均为5mm。粘贴于底板上的第一层为硝酸纤维素膜，硝酸纤维素膜靠近检测线的一端粘贴有结合垫(第二层)，另一端粘贴有吸收垫(第二层)，结合垫远离硝酸纤维素膜的一端上粘贴有样品垫(第三层)，三层之间相互交错2.5mm。