[发明专利]一种提高由三孢布拉氏霉菌生产番茄红素产量的方法

权利要求书

1.一种提高由三孢布拉氏霉菌生产番茄红素产量的方法，其特征在于步骤如下：

(1)平板培养

取去皮土豆20g，加入200mL的去离子水煮开，保持沸腾20分钟后冷却，滤去土豆，清液中加入2g葡萄糖，2g琼脂，溶解后装入三角瓶中，115℃灭菌30min，趁热倒入平皿，冷却降温后即可制得固体PDA培养基；取三孢布拉氏霉Blakeslea trispora(+)(-)菌株孢子悬液用玻璃棒分别涂布于含有PDA培养基的平板中；涂布的平板在培养箱里26-28℃培养36-40h后，室温下放置24h；

(2)样品的预处理

异戊烯醇、3-甲基-3-丁烯-1-醇、香叶醇、甲羟戊酸内酯之一经过乙醇溶解配成溶液；

(3)种子培养

将20g淀粉、25g玉米浆、12.5g葡萄糖添加到1L的烧杯中，用自来水定容到500mL，放于水浴锅上，100℃条件下糊化40min，冷却后加入0.5g的磷酸二氢钾，0.05g的七水硫酸镁，0.005g的维生素B₁，搅拌均匀后，用3mol/L的氢氧化钠溶液将pH调整至6.5，然后分装到5个500mL的三角瓶中，每瓶加100mL的种子培养基，用纱布封口，在115℃灭菌锅中灭菌30min；

(4)接菌

在无菌操作台上，将平板培养好的三孢布拉氏霉Blakeslea trispora(+)(-)菌用接种针各挑取一环的正菌、负菌，分别加入到装有100mL种子培养基的三角瓶中，正菌接一瓶，负菌接四瓶，用纱布封口，放于恒温摇床中，在26-28℃，180-200r/min的条件下分别培养36-40h得到1瓶正菌、4瓶负菌种子液；

(4)发酵培养

称取20g淀粉、22.5g玉米浆，加入到1L烧瓶中，加入去离子水定容到500mL，搅拌均匀，然后放于100℃的水浴锅中，糊化40min，冷却后加入0.5g的磷酸二氢钾，0.05g的七水硫酸镁，0.005g的维生素B₁，搅拌均匀后，用1mol/L的氢氧化钠溶液将pH调整至6.5，装到三角瓶中，加入80mL的发酵培养基，用纱布封口，在121℃灭菌锅中灭菌30min；

(6)接种与发酵

在无菌操作室里，将上述培养的1瓶正菌、4瓶负菌种子液，全部充分混合得到发酵种子液，每80mL的上述发酵培养基加入9mL的混合好的发酵种子液得到起始发酵液；再加入配制好的异戊烯醇、3-甲基-3-丁烯-1-醇、香叶醇、甲羟戊酸内酯溶液之一，然后放于恒温培养箱中，恒温培养箱转速为220r/min，温度控制在28℃，发酵48h时，入800uL的体积浓度为10％的烟碱，发酵培养120h后下罐，收集菌体，在45℃，0.08Mpa的真空干燥箱中干燥，24h后取出即可；

上述异戊烯醇的添加浓度为10-60mg/L起始发酵液体积，香叶醇的添加浓度为10-60mg/L起始发酵液体积，3-甲基-3-丁烯-1-醇的添加浓度为10-170mg/L起始发酵液体积，甲羟戊酸内酯的添加浓度为10-30mg/L起始发酵液体积，添加时间在发酵开始后0-36小时加入。

2.根据权利要求1的方法，其特征在于：其中异戊烯醇、香叶醇、3-甲基-3-丁烯-1-醇和甲羟戊酸内酯的添加时间在发酵开始加入。