[发明专利]一种检测莱克多巴胺的免疫层析试纸及其制备方法有效

专利信息
申请号: 201110157580.1 申请日: 2011-06-13
公开(公告)号: CN102230936A 公开(公告)日: 2011-11-02
发明(设计)人: 马岚;卢体康;秦智锋;袁航;吴峰 申请(专利权)人: 清华大学深圳研究生院
主分类号: G01N33/577 分类号: G01N33/577;G01N33/532;G01N33/544
代理公司: 北京纪凯知识产权代理有限公司 11245 代理人: 关畅
地址: 518055 广东省深圳*** 国省代码: 广东;44
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摘要:
搜索关键词: 一种 检测 多巴胺 免疫 层析 试纸 及其 制备 方法
【权利要求书】:

1.一种检测莱克多巴胺的免疫层析试纸,包括含有超顺磁性复合粒子标记莱克多巴胺抗体的样品垫、连接于所述样品垫一端的反应垫、连接于所述反应垫另一端的吸水垫;所述反应垫包被有相互分离的检测线和质控线,所述检测线含有莱克多巴胺抗原,所述质控线含有能与所述莱克多巴胺抗体特异结合的抗抗体。

2.根据权利要求1所述的试纸,其特征在于:

所述反应垫为硝酸纤维素膜;

所述超顺磁性复合粒子标记莱克多巴胺抗体为莱克多巴胺抗体和超顺磁性复合粒子的肽键共价结合形成的聚合体;

所述莱克多巴胺抗体为莱克多巴胺单克隆抗体或莱克多巴胺多克隆抗体,所述莱克多巴胺抗体具体为莱克多巴胺单克隆抗体;

所述莱克多巴胺抗原为莱克多巴胺半抗原与载体蛋白的偶联物;

所述载体蛋白与莱克多巴胺半抗原的偶联比为1∶8~1∶10,具体为1∶10;

所述与所述莱克多巴胺抗体特异结合的抗抗体为羊抗鼠IgG抗体;

所述莱克多巴胺抗原和所述羊抗鼠IgG抗体的浓度均为1mg/ml。

3.根据权利要求1或2所述的试纸,其特征在于:

所述超顺磁性复合粒子标记莱克多巴胺抗体按照如下方法制备:

1)将每2.5mg超顺磁性复合粒子、0.96mg1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺、1.15mg N-羟基丁二酰亚胺和1ml浓度为0.1M、pH值为4.7的2-(N-吗啡啉)乙磺酸缓冲液混匀,反应,得到活化后磁性粒子;

2)将每2.5mg步骤1)得到活化后磁性粒子、0.15mg莱克多巴胺抗体和0.8ml浓度为50mM pH为8.5的硼砂缓冲液混匀、反应,得到含有偶联后磁性粒子的反应液;

3)向步骤2)得到的反应液中加入BSA混匀得到混合液、反应,得到含有封闭后磁性粒子的反应液;

所述BSA在所述混合液中的浓度为5%(质量百分含量)。

所述莱克多巴胺抗原按照如下方法制备:

A)取每0.68g莱克多巴胺、42.5ml吡啶、0.24g丁二酸酐混匀,回流、去吡啶,得到莱克多巴胺丁二酸酐酰化物;

B)取每40ml N,N-二甲基甲酰胺与40ml二氧六环混合,得到混合液a;

C)将每8ml步骤A)得到的莱克多巴胺丁二酸酐酰化物和52.4μl三丁基正胺混合,再加入30μl氯甲酸异丁酯反应,得到活化后莱克多巴胺;

D)取每100mg载体蛋白溶解于10ml 0.1mol/L,pH为8.5的硼酸钠溶液,得到载体蛋白硼酸钠溶液;

E)将每10ml步骤D)得到的载体蛋白硼酸钠溶液加入8.082ml步骤C)得到的活化后莱克多巴胺反应,得到反应液b。

4.根据权利要求1-3中任一所述的试纸,其特征在于:

所述超顺磁性复合粒子标记莱克多巴胺抗体的制备方法中:

步骤1)中,反应温度为37℃,反应时间为0.5h;

步骤2)中,反应温度为25℃,反应时间为3.5h;

步骤3)中,反应温度为37℃,反应时间为0.5h。

所述莱克多巴胺抗原的制备方法中:

步骤A)中,所述回流温度为50℃,所述回流时间为24h;所述去除吡啶采用在50℃进行减压蒸馏24h;

步骤C)中,所述混合的温度为4℃,所述混合的时间为15min,所述反应的温度为25℃,所述反应的时间为1h;

步骤E)中,所述反应温度为4℃,所述反应时间为12h。

5.根据权利要求1-4中任一所述的试纸,其特征在于:

所述超顺磁性复合粒子标记莱克多巴胺抗体的制备方法中:

在所述步骤3)后,还包括将所述含有封闭后磁性粒子的反应液中的封闭后磁性粒子进行洗涤、悬浮,得到超顺磁性复合粒子标记莱克多巴胺抗体的步骤,所述洗涤液和悬浮液均为浓度为0.02M pH为7.4的PBS缓冲液。

所述莱克多巴胺抗原的制备方法中,

在所述步骤E)后还包括将步骤E)得到的反应液b透析、纯化、冻干,得到莱克多巴胺抗原。

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