[发明专利]顶体蛋白的用途及提取方法

权利要求书

1.顶体蛋白用于抑制癌细胞的扩散。

2.顶体蛋白用于抑制MCF-7、Bel7402、BGC823、A2780、A549或HCT-8细胞的扩散。

3.顶体蛋白在制备治疗癌症的药物中的应用。

4.顶体蛋白在制备治疗抑郁症的药物中的应用。

5.根据权利要求3所述的顶体蛋白，其特征在于：所述癌症包括妇科肿瘤、消化道肿瘤、肺癌、肝癌、白血病和恶性淋巴瘤。

6.根据权利要求5所述的顶体蛋白，其特征在于：所述妇科肿瘤包括子宫肌瘤、卵巢癌、乳房瘤、乳腺癌和宫颈癌；所述消化道肿瘤包括食道癌、胃癌、大肠癌。

7.根据权利要求3至6任一所述的顶体蛋白，其特征在于：所述顶体蛋白用于制备胶囊、颗粒、片剂、滴丸、中西药复方制剂、口服液或注射液。

8.一种顶体蛋白的制备方法，其特殊之处在于，包括以下步骤：

1]取动物精液或复溶的动物精液冻干粉，向其中加入浓度为1％～5％的稀酸溶液，再加入无机酸将pH调节至2～5，以2000r/min～8000r/min的转速离心15～30min后弃去沉淀物，将得到的上清液合并，浓缩；选取动物精液时，动物精液与稀酸的质量比为1∶1～1∶20；选取动物精液冻干粉时，动物精液冻干粉与复溶溶剂水的质量比为1∶1～1∶20，动物精液冻干粉复溶溶液与稀酸的比例为质量比为1∶1～1∶16；

2]向步骤1处理所得的上清液中加入无机铵盐，调节饱和度至0.2-0.5后放置3-5小时，再以2000r/min～8000r/min离心15～30min，弃去上清液，沉淀用醋酸缓冲溶液溶解后，得到顶体蛋白粗提物；

3]将经步骤3处理所得的蛋白粗提物进行柱层析，用醋酸缓冲溶液平衡洗脱，处理完成后收集洗脱液；

4]将洗脱液以2000r/min～8000r/min离心5～10min，弃去上清液，所得沉淀洗涤后以2000r/min～8000r/min继续离心1～3次，每次离心5～10min，收集沉淀，即得到顶体蛋白。

9.根据权利要求8所述的顶体蛋白的制备方法，其特征在于：所述步骤1中，稀酸溶液是浓度为1.7％～4.5％的醋酸溶液、甲酸溶液、丙酸溶液、丁酸溶液、盐酸溶液、硫酸溶液或磷酸溶液，调节pH的无机酸为1mol/L的硫酸、盐酸、氢溴酸或磷酸，调节pH至2.8～4.6；动物精液与稀酸的质量比为1∶4；选取动物精液冻干粉时，动物精液冻干粉与复溶溶剂水的质量比为1∶10，动物精液冻干粉复溶溶液与稀酸的比例为质量比为1∶5.5；所述步骤2中无机铵盐是硫酸铵、硫酸氢铵、碳酸铵、碳酸氢铵或磷酸铵，调节饱和度至0.3后在4℃环境中放置3-5小时；所述醋酸缓冲溶液是pH＝2，0.1mol/L的醋酸缓冲溶液；所述步骤3中，是用葡聚糖凝胶柱、羟丙基葡聚糖凝胶柱、丙烯酰胺凝胶柱或琼脂糖凝胶柱进行柱层析，所述醋酸缓冲溶液是pH＝2，0.1mol/L的醋酸缓冲溶液，醋酸缓冲溶液平衡洗脱的流速为0.5ml/min，处理完成后收集在680nm处有最大吸收的洗脱液；所述步骤4中，洗涤沉淀使用纯蒸馏水；所述步骤1至4中的离心转速为2500r/min～6000r/min。

10.根据权利要求9所述的顶体蛋白，其特征在于：所述动物精液冻干粉为健康驴、牛、羊或马的精液冻干粉。