[发明专利]一株微生物菌株及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及一株微生物菌株及其应用，具体涉及一种烟草烟碱降解菌——微杆菌GYC29(Microbacterium sp.GYC29)CCTCC NO：M2010311及其在烟草中的应用，属于微生物应用技术领域。

背景技术

烟碱又名尼古丁(Nicotine)，是烟草生物碱中的主要成分。烤烟中烟碱的含量一般在1.5％～3.5％，以2.5％左右为宜。烟碱含量过低，劲头太小，烟碱含量过高，劲头太大，会引起刺呛辛辣感。降低烟草中的烟碱含量，目前主要有三条途径：(1)从农业种植的角度进行调控：主要从遗传、生态和栽培等方面来进行控制。(2)从化学的角度：烟叶中的生物碱可通过用热水漂洗、有机溶剂萃取、气体抽提和蒸汽蒸馏等处理烟叶的方法将烟叶中的烟碱脱掉。(3)从微生物和酶的角度：从烟叶、烟籽和土壤中分离能够降解烟碱的微生物，培养后直接或者分离出酶系后作用于烟叶，降低烟叶中的烟碱含量，从而提高烟叶的可用性。对于已经成熟采收了的烟叶，就只能采用第2和3种方法。其中，使用溶剂抽提等化学方法虽然可以去除一部分烟碱，但同时会引起烟草中的一些致香成分的损失和外观色泽的显著变化，从而在一定程度上降低了处理烟叶的可用性。而通过微生物或酶来处理烟叶，由于酶具有专一性，因此可以较好地避免这些问题。

在微生物降解烟碱方面，C.Enders等早在1947年就对酵母降解烟碱进行了研究，以后逐渐成为人们关注的课题。国外一些大的烟草企业如菲利普莫瑞斯烟草公司、英美烟草公司等很早就利用微生物对烟草中的烟碱进行降解，以此来满足一部分消费群体对低尼古丁香烟的需求。目前已报道的能够降解烟碱的微生物主要包括2大类：酵母和细菌。国外报道如Deharyomyces nicotianae，Micrococus nicotianae，Pseudomonas，Alcaligenes paradox us，Arthrobacterglobif ormils，Enterobacter cloacae，Cunninghamella echinulata，Nicotianae plumbaginif olia，Arthrobacter oxidans等。国内孙君社等(2002)从烟叶仓库或露天烟垛周围的土壤中分离出降解烟草烟碱的烟草假单胞菌(Pseudomonas nicotianae)。利用微生物来处理烟叶，不仅降解了烟叶中的烟碱，改善烟叶的品质，还减少对环境的污染，提高烟叶资源的利用率，具有较高的经济效益和社会效益。因此，筛选能够高效降解烟碱的微生物，用于处理烟草烟叶中的烟碱，具有广泛的应用前景。在已报道的烟碱降解菌中，尚未有利用微杆菌降解烟碱的报道。

发明内容

本发明的主要目的在于提供一种能够高效降解烟碱的微生物菌株即微杆菌GYC29(Microbacterium sp.GYC29)，保藏号为CCTCC NO：M2010311，及其相应的培养条件并公开一种利用微生物降解烟草中的烟碱提高烟叶可用性的方法。

本发明通过如下方案实现：

一种微生物菌株，其特征在于：它为微杆菌Microbacterium sp.GYC29，保藏号为CCTCC NO：M2010311；菌落黄色，表面光滑不透明边缘整齐；革兰氏阳性，最适生长温度为25-30℃。

所述菌株通过如下途径获得：

将植烟土壤分别取10g加入到含有200mL无菌水的三角瓶中，于30℃，200rpm的摇床摇30min，过滤，取1mL细菌悬液转接至另一个含200mL富集培养基的三角瓶中，富集培养3d，然后取1mL培养物转接至另一个含200mL烟碱浓度为0.2％的烟碱培养基的三角瓶中培养3d。将培养物稀释涂布到烟碱选择培养基上，经分离纯化和耐受烟碱能力试验，获得在0.8％烟碱浓度培养液中可以旺盛生长的降解烟碱菌株，即微杆菌Microbacterium sp.GYC29。

所述富集培养基为：蛋白胨10g，酵母提取物5.0g，NaCl 10g，1g K₂HPO₄，水1000ml，pH7.0。

所述烟碱培养基为：0.2w/v％烟碱，13.3g K₂HPO₄·3H₂O，4g KH₂PO₄，0.2g MgSO₄·7H₂O，0.05ml微量元素，水1000ml，pH7.0。