[发明专利]蝴蝶兰FT基因的cDNA序列及其编码的氨基酸序列

说明书

技术领域

本发明属于分子生物学中的基因领域，具体涉及蝴蝶兰FT（Flowering locus T）基因的cDNA序列及其编码的氨基酸序列。

背景技术

遗传分析表明，小麦和大麦在春化过程中，有3个基因控制着其对春化的需求，这3个基因分别是VRN1，VRN2和FT（Flowering locus T，简称FT）（VRN3）（Trevaskis et al., 2007）。近年来，FT基因已在多种植物中被克隆鉴定，然而在兰科（Orchidaceae）植物中，尤其在蝴蝶兰中鲜有报道。

蝴蝶兰属于兰科蝴蝶兰属(Phalaenopsis)植物，其体态轻盈，花色艳丽，色泽丰富，具有极高的观赏和经济价值。由于大部分蝴蝶兰品种的花期在3-5月份，为提高商品价值，必须调节蝴蝶兰的花期，使其达到全年开花，特别是应中国传统节日春节开花。研究表明，蝴蝶兰的花芽分化和发育主要受温度的调节，成熟植株经夜温15-20℃，日温20-25℃处理，才能进行花芽分化和发育（小西国义等，1996）。蝴蝶兰的花期调节方法主要采用空调和高山低温处理等，其中高山低温处理催花效果好，已广泛应用于生产。因此，弄清蝴蝶兰如何对低温的响应，特别是生理生化方面的响应已经引起科学界的普遍关注。然而，低温诱导蝴蝶兰花芽分化与发育的基因调控机制的研究尚无报道。

本研究以在低温环境下诱导的蝴蝶兰花芽为检测方（tester），以在常温条件下生长的蝴蝶兰的顶端生长组织为驱动方（driver），先构建正向抑制消减杂交文库，然后随机挑取克隆进行测序，根据测序结果并在NCBI数据库进行Blast比对分析，获得了蝴蝶兰的FT（Flowering locus T）的基因序列，希望为低温诱导蝴蝶兰花芽分化与发育的基因调控机制提供一定的依据。

发明内容

本发明所解决的技术问题在于提供一种蝴蝶兰FT基因的cDNA序列。

本发明所解决的技术问题在于提供一种蝴蝶兰FT基因的cDNA序列编码的氨基酸序列。

本发明所解决的技术问题在于提供一种获取蝴蝶兰FT基因克隆的方法。

为了解决上述技术问题，一方面，本发明提供了一种分离出的蝴蝶兰FT基因的cDNA序列，其具有如SEQ ID NO:1所示的核苷酸序列。

所述的蝴蝶兰FT基因的cDNA序列，该cDNA序列包含5’端非编码区1bp-58bp、蛋白编码区59bp-589bp和3’端非编码区590bp-809bp，编码包含176个氨基酸的多肽。

另一方面，本发明还提供了蝴蝶兰FT基因的cDNA序列编码的多肽，其特征在于，具有如SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列。

另外，本发明还提供了一种获取蝴蝶兰FT基因克隆的方法。具体而言，本发明以蝴蝶兰杂交种Phalaenopsis hybrida cv. Fortune saltman的成熟植株为材料，分别置于常温温棚（白天28±3 ℃，湿度70-95%；夜晚25±1.5 ℃，湿度100%）和低温温棚（白天28±3 ℃，湿度70-95%；夜晚21±1.5 ℃，湿度100%）中种植，其栽培和施肥管理都一样。低温温棚中的植株在40-60天内，分化出0-40 mm大小不等的花芽，而常温温棚中的植株仍然处于营养生长阶段。因此，以40 mm蝴蝶兰花芽为检测方（tester），以常温温棚下生长的蝴蝶兰顶端生长组织为驱动方（driver），分别提取总RNA，再根据SMART^TM PCR cDNASynthesis Kit和PCR-Select^TM cDNA Subtraction Kit（Clontech，USA）的操作步骤构建低温诱导蝴蝶兰花芽的正向抑制削减文库，如图1-图5，然后随机挑取阳性克隆进行测序，这些表达序列标签（EST）编码各种不同功能的蛋白，其中之一在NCBI数据库中匹配到Flowering locus T（FT）基因。该cDNA序列全长为809bp，其序列如SEQ ID NO.1所示，其开放阅读框为从5’端第59位至第589位碱基，共531bp，其编码的蛋白的氨基酸序列具有176个氨基酸残基，其序列如SEQ ID NO.2所示。