[发明专利]含有etr1基因的双元表达载体的构建方法及其应用

权利要求书

1.含有etr1基因的双元表达载体的构建方法，其特征在于：扩增拟南芥突变体etr1基因并克隆至表达载体pEASY-T1上获得pEASY-T1-etr1质粒，在该质粒的AscI和BamHI限制性内切酶位点用双酶切体系酶切后获得etr1基因片段，用同样的双酶切体系对pFGC5941质粒进行双酶切获得骨架片段，将etr1基因片段和骨架片段用T4 DNA连接酶进行连接，成为环状质粒，得到pFGC5941-etr1双元表达载体。

2.按照权利要求1所述含有etr1基因的双元表达载体的构建方法，其特征在于：扩增拟南芥突变体etr1基因的正向引物为5’- ttGGCGCGCCaaCTCCCCTTTTCTCCTTCTC-3’，其中GGCGCGCC是添加的酶切位点，tt、aa是添加的保护碱基，CTCCCCTTTTCTCCTTCTC是特异引物序列；扩增拟南芥etr1基因的反向引物为5’- cgGGATCCcgCCTTTACATGCCCTCGTACA-3’，其中GGATCC是添加的酶切位点，cg、cg是添加的保护碱基，CCTTTACATGCCCTCGTACA是特异引物序列。

3.按照权利要求1或2所述含有etr1基因的双元表达载体的构建方法，其特征在于：所述拟南芥突变体etr1基因来自于编号为CS237的拟南芥突变体。

4.含有etr1基因的pFGC5941-etr1双元表达载体在延长鲜切花瓶插寿命中的应用。

5.延长鲜切花瓶插寿命的方法，其特征在于：用含有etr1基因的pFGC5941-etr1双元表达载体转化根癌农杆菌LAB4404感受态细胞，采用根癌农杆菌介导的植物转基因方法将Atetr1基因导入鲜切花植物基因组，转化成功后常规培养，即可。