[发明专利]类人弹性蛋白及其生产方法

权利要求书

1.一种类人弹性蛋白，其特征在于：其氨基酸序列中含有VAPGVGVAPGVGVAPGVGS基本单元。

2.一种核酸分子，其特征在于编码权利要求1中所述蛋白氨基酸序列的核苷酸序列的DNA。

3.一种基因载体，其特征在于含有权利要求2所述核酸分子。

4.根据权利要求1所述的类人弹性蛋白的生产方法，其特征在于包括类人弹性蛋白的工程菌的构建，工程菌的发酵培养，类人弹性蛋白的诱导表达和类人弹性蛋白的纯化。

5.根据权利要求4所述的类人弹性蛋白的生产方法，其特征在于：所述类人弹性蛋白的工程菌的构建如下：使用大肠杆菌偏爱密码子反翻译人弹性蛋白中的特定氨基酸序列并制备串联重复序列，然后亚克隆至原核表达载体中获得类人弹性蛋白原核表达载体；将类人弹性蛋白原核表达载体转化至大肠杆菌获得工程菌。

6.根据权利要求4所述的类人弹性蛋白的生产方法，其特征在于：所述工程菌的发酵培养基为：胰蛋白胨1.0～10.0g/L，酵母提取物10.0～50.0g/L，葡萄糖10.0～50.0g/L，NaCl 1.0~10.0g/L，K₂HPO₄ 5.0~15.0g/L，NaH₂PO₄ 2.5~6.0g/L，(NH₄)₂SO₄ 3.6~8.8g/L，明胶（明胶水解物）1.0～30.0g/L，MgSO₄.7H₂O 1.5~5.0g/L，EDTA 0.5～2.0g/L，FeCl₃.6H₂O 50.0~200.0mg/L，MnSO₄.4H₂O 10.0~30.0mg/L，ZnSO₄ 5.0~10.0mg/L，H₃BO₃ 1.0~5.0mg/L，Na₂MoO₄.2H₂O 1.0~5.0mg/L，CoCl₂.6H₂O 1.0~5.0mg/L，CuCl₂.2H₂O 1.0~5.0mg/L。

7.根据权利要求4所述的类人弹性蛋白的生产方法，其特征在于：所述工程菌的发酵培养条件为：培养温度37℃，pH 6.8~7.0，溶氧15～30%，空气流量为1～4VVM，搅拌转速300~1000rpm，接种量5%，种子培养基为含30mg/L卡那霉素和5.0g/L葡萄糖的LB。

8.根据权利要求4所述的类人弹性蛋白的生产方法，其特征在于所述类人弹性蛋白的纯化如下：离心收集工程菌，裂解菌体，然后用缓冲液抽提，经亲和层析、精制和除热源后获得重组类人弹性蛋白。