[发明专利]人CD3+CD8+γδT淋巴细胞及其制备方法与应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种T淋巴细胞及其制备方法与应用，特别涉及一种人CD3⁺CD8^+γδT淋巴细胞及其制备方法与应用。

背景技术

淋巴细胞是具有特异免疫识别功能的细胞系，人和哺乳类动物的淋巴细胞系是由形态相似、功能各异的不均一细胞群所组成。按其个体发生、表面分子和功能的不同，可将淋巴细胞系分为T细胞和B细胞二个亚群。其中的T细胞是由一群功能不同的异质性淋巴细胞组成，由于它在胸腺内分化成熟故称为T细胞。成熟T细胞由胸腺迁出，移居于周围淋巴组织中淋巴节的副皮质区和脾白髓小动脉的周围。不同功能成熟的T细胞均属小淋巴细胞，在形态学上不能区分，但可借其细胞膜表面分子不同加以鉴别。在T细胞发育不同阶段以及成熟T细胞在静止期和活化期，其细胞膜分子表达的种类和数量均不相同。由于这些分子在T细胞表面相当稳定，故可视为T细胞的表面标志，可以用以分离、鉴定不同功能的T细胞。这些分子的单克隆抗体对临床相关疾病的诊断和治疗也具有重要应用价值。其中，TCR(T cell receptor)是T细胞识别蛋白抗原的特异性受体，不同的T细胞克隆其抗原识别受体的分子结构也是不相同的。TCR有两种类型，均由两条不同的跨膜的多肽链组成，即αβTCR和γδTCR。大多数成熟T细胞(约占95％)的TCR分子是由α和β二条异二聚体肽链组成的αβTCR分子。TCRγδ细胞多见于胸腺内早期T细胞(CD4-，CD8-，TCRγδ+)，而在人周围血成熟T细胞(CD3+，TCRγδ+)中所占的比例甚少，约为1％～10％。对这种新发现的T细胞的生理功能尚不清楚。

发明内容

本发明的目的是提供一种新的人T淋巴细胞。

本发明所提供的人T淋巴细胞，名称为人CD3⁺CD8^+γδT淋巴细胞，表达如下三种T淋巴细胞膜分子：人白细胞分化抗原CD3、人白细胞分化抗原CD8和人^γδT细胞受体。

实验证明，人CD3⁺CD8^+γδT淋巴细胞可以缓解肿瘤放疗和/化疗所致骨髓抑制。以人CD3⁺CD8^+γδT淋巴细胞为活性成分的缓解肿瘤放疗和/化疗所致骨髓抑制的产品也属于本发明的保护范围。

实验证明，本发明的人CD3⁺CD8^+γδT淋巴细胞配合化疗和/或放疗，可使肺癌原发病灶和转移病灶缩小，使肺癌细胞转移胸椎、肺癌细胞转移椎体和肺癌细胞转移肋骨逐渐硬化。以人CD3⁺CD8^+γδT淋巴细胞为活性成分的治疗肿瘤的药物或产品，以及活性成分包括治疗肿瘤的化疗药物和人CD3⁺CD8^+γδT淋巴细胞的治疗肿瘤的成套药物或成套产品，均属于本发明的保护范围。

所述肿瘤具体可为肺癌、胃癌或结肠癌。

上述人CD3⁺CD8^+γδT淋巴细胞可按照包括如下步骤的方法制备：离体的人外周血单个核细胞在如下人CD3⁺CD8^+γδT淋巴细胞专用培养基中培养并传代得到人CD3⁺CD8^+γδT淋巴细胞：在RPMI 1640培养基中添加人血浆、异戊烯焦磷酸和人白细胞介素-2得到的培养基，所述人血浆在所述人CD3⁺CD8^+γδT淋巴细胞专用培养基中的浓度是10％(体积百分浓度)，所述异戊烯焦磷酸在所述人CD3⁺CD8^+γδT淋巴细胞专用培养基中的浓度是100μg/L，所述人白细胞介素-2在人CD3⁺CD8^+γδT淋巴细胞专用培养基中的浓度是60万U/L。

其中，所述人血浆具体可为人AB血浆。所述RPMI 1640培养基可从商业途径获得，如可为GENMED公司产品编号为GMS12049.2A的RPMI 1640培养基。

其中所述离体的人外周血单个核细胞在所述人CD3⁺CD8^+γδT淋巴细胞专用培养基中传代5代以上。

上述培养和传代均可在37℃，5％CO₂中进行。