[发明专利]一种鉴别尼罗罗非鱼、奥利亚罗非鱼及其杂交鱼的分子标记方法无效
| 申请号： | 201110163113.X | 申请日： | 2011-06-17 |
| 公开（公告）号： | CN102226220A | 公开（公告）日： | 2011-10-26 |
| 发明（设计）人： | 李建林;俞菊华;唐永凯;李红霞;徐跑 | 申请（专利权）人： | 中国水产科学研究院淡水渔业研究中心 |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68 |
| 代理公司： | 南京经纬专利商标代理有限公司 32200 | 代理人： | 李纪昌 |
| 地址： | 江苏省无锡市*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 鉴别 罗罗 奥利亚 罗非鱼 及其 杂交 分子 标记 方法 | ||
1.一种鉴别尼罗罗非鱼、奥利亚罗非鱼及其杂交鱼的分子标记方法，其特征在于，采用以下提取步骤：
（1）选用3对特异微卫星引物组合进行多重PCR反应，其中这3对特异微卫星引物如下：
CCCTCTGTTTCCATCTCA；GATACCTGTCCATACCTCCTC；
GCTCGCTCCAGAAAAATCAC；GTCAAAAAGGCATGGCAAAG；
CTGCACTTTTACTGAGGG；TGGGAGATTAACAGAATAACA
（2）从待测罗非鱼采样血液或鳍条，采用DNA提取法提取基因组DNA；
（3）用步骤（2）的基因组DNA为模板，步骤（1）所选的3对微卫星引物组合进行多重PCR扩增；
（4）对步骤（3）的PCR产物用8.0％的非变性聚丙烯酰胺凝胶进行电泳分离，银染法染色后，拍照记录电泳结果；
（5）根据多重PCR的电泳检测结果，鉴别尼罗罗非鱼、奥利亚罗非鱼及它们的杂交鱼。
2. 根据权利要求1所述的鉴别尼罗罗非鱼、奥利亚罗非鱼及其杂交鱼的分子标记方法，其特征在于，步骤（3）中，在进行PCR扩增时，PCR反应总体积为15 μL，其中含10×反应缓冲液1.5 μL，Mg2+ 2 mmol/L，dNTP 200μmol/L, 3对上下游引物各0.2μmol/L，Taq酶0.4U，DNA 50 ng～100 ng，用灭菌双蒸馏水补足体积。
3.根据权利要求1所述的鉴别尼罗罗非鱼、奥利亚罗非鱼及其杂交鱼的分子标记方法，其特征在于，步骤（3）中，PCR反应条件为：94 ℃ 3 min；94 ℃ 20 s，52 ℃退火 20s，72 ℃ 20s，25～30个循环；72℃延伸5 min。
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