[发明专利]一种鉴定耐盐棉花的方法及专用SSR标记

说明书

技术领域

本发明涉及一种鉴定耐盐棉花的方法及专用SSR标记。 

背景技术

棉花的耐盐性是一个十分复杂的性状，涉及多种生理生化代谢途径和诸多基因调控，不但受棉花自身遗传因素影响，还受外界环境条件和栽培措施的影响，而且各栽培种之间、品种之间及同一品种的不同生育阶段、不同组织器官之间耐盐性都存在较大的差异，很可能存在多种不同的耐盐机制，至今尚未形成统一认识，在很多领域尚存在不同看法和争论。棉花耐盐性的复杂给耐盐品种的选育和鉴定带来极大困难。若能筛选到几个与棉花耐盐有关的标记，直接从分子水平上对棉花的耐盐性进行鉴定评价，将是棉花耐盐性鉴定方法的一大突破。 

发明内容

本发明的一个目的是提供一种用于辅助鉴定耐盐棉花的引物组合物。 

本发明所提供的用于辅助鉴定耐盐棉花的引物组合物，为如下中任意一种： 

(1)HAU1918、HAU1058和TMB1288 

(2)HAU1918、NAU1085和HAU773 

(3)HAU1918、HAU1058和NAU1085 

(4)HAU1918、HAU1058和TMB1288 

(5)HAU1918、HAU1058、HAU773和NAU1085 

(6)HAU1918、NAU1085、HAU773和TMB1288 

(7)HAU1918、HAU1058、NAU1085和TMB1288 

(8)HAU1918、HAU1058、HAU773、NAU1085和TMB1288 

(9)HAU1918和TMB1288 

(10)NAU1085和TMB1288 

(11)HAU773和TMB1288 

(12)HAU1058和TMB1288； 

所述HAU1918的一条引物序列如SEQ ID NO：3所示，另一条引物序列如SEQ ID NO：4所示； 

所述HAU1058的一条引物序列如SEQ ID NO：5所示，另一条引物序列如SEQ IDNO：6所示； 

所述TMB1288的一条引物序列如SEQ ID NO：1所示，另一条引物序列如SEQ ID NO：2所示； 

所述NAU1085的一条引物序列如SEQ ID NO：7所示，另一条引物序列如SEQ IDNO：8所示； 

所述HAU773的一条引物序列如SEQ ID NO：9所示，另一条引物序列如SEQ ID NO：10所示。 

上述引物组合物在辅助鉴定耐盐棉花中的应用也属于本发明的保护范围。 

本发明的另一个目的是提供第一种辅助鉴定耐盐棉花的方法。 

本发明所提供的辅助鉴定耐盐棉花的方法，包括如下步骤： 

分别用上述引物组合物中的每对引物对待测棉花单株进行PCR扩增，获得PCR扩增产物，对所述PCR扩增产物进行检测，根据如下方法确认所述待测棉花单株为耐盐棉花还是盐敏感棉花： 

若所述引物组合物对应的所有PCR扩增产物中含有耐盐特征带T且无敏盐特征带S1，则确认所述待测棉花单株候选为耐盐棉花； 

若所述引物组合物对应的所有PCR扩增产物中含有敏盐特征带S1，则确认所述待测棉花候选为盐敏感棉花； 

若所述引物组合物对应的所有PCR扩增产物中不含有敏盐特征带S1也不含有任何耐盐特征带T，则确认所述待测棉花候选为盐敏感棉花； 

所述敏盐特征带S1为60bp的DNA； 

所述耐盐特征带T为T4、T3A、T3B、T5和T2中的至少一种； 

所述T4为210bp的DNA；所述T3A为280bp的DNA；所述T3B为240bp的DNA；所述T5为220bp的DNA；所述T2为160bp的DNA。 

上述第一种鉴定方法中，所述PCR扩增的体系由10×PCR buffer、dNTP、Taq DNA聚合酶、SSR标记中的一条DNA分子、SSR标记中的另一条DNA分子和模板DNA组成；dNTP在体系中的浓度为0.2mmol/L，Taq DNA聚合酶在体系中的浓度为0.05U/μl，SSR标记中的一条DNA分子在体系中的浓度为0.5μmol/l，SSR标记中的另一条DNA分子在体系中的浓度为0.5μmol/l，模板DNA在体系中的浓度为5.0ng/μl。