[发明专利]一种从紫草中分离出萘醌类有效成分的方法

权利要求书

1.一种从紫草中分离出萘醌类有效成分的方法，其步骤是：

A、将紫草干燥茎块烘干、粉碎后用乙醇超声提取，乙醇的倒入量为药材重量的5~10倍，置入超声仪中超声30~50min，再将超声后的物质过滤，回收过滤溶液中的溶剂，将回收的溶剂再倒入三角瓶，继续超声，重复本步骤3~5次，得到用乙醇提取的干浸膏；

B、分别用溶剂石油醚和乙酸乙酯将乙醇干浸膏萃取，石油醚和乙酸乙酯的量为浸膏的4～7倍，反复萃取3～5次，至萃取液无色，分别将石油醚和乙酸乙酯萃取液过滤；回收过滤溶液中的溶剂，得到石油醚和乙酸乙酯萃取浸膏；

C、将（A）和（B）步骤的浸膏用等体积的乙酸乙酯超声溶解，用其1～3倍量的400-500目硅胶拌样，蒸干至无乙酸乙酯气味；取400ml、1500mL Flash柱各一个，400ml的柱装拌样硅胶，1500ml的柱仅装硅胶作为分离柱，二根柱都干法上样；分别用石油醚洗脱至柱平衡，再将二根柱串联，串联后的柱子接到中低压0.1~5兆帕制备型色谱柱上，中低压0.1~5兆帕制备色谱柱的制备条件为泵压力100-200帕，流速100ml/min，检测器的监控波长为395nm，检测器的收集波长为280nm，死体积为7mL；

D、洗脱剂为石油醚含B：B是按乙酸乙酯：丙酮=4:1混合的溶剂2%v/v，6%v/v，10%v/v的比例洗脱，每组洗脱剂中还加上0.2%v/v的甲酸，洗脱剂为1份B加49份石油醚加0.1份甲酸混合，在中低压0.1~5兆帕色谱柱的荧屏监控图下洗脱柱子，并收集流份，按监控图出现的谱峰收集，再以薄层色谱检识辅助，取TLC检测紫色斑点中Rf值一致的流份，合并流分后得到六个粗的化合物；

E、  将中低压0.1~5兆帕制备色谱上串联的2根柱子换成C₁₈柱、将六个粗品化合物分别用甲醇溶解，注入C₁₈柱中，用不同梯度的甲醇-水洗脱，收集流分，蒸干，六个化合物得到进一步的纯化；

F、六个化合物经过碱性反应产生紫色，无色亚甲蓝显色试验呈阳性，说明为萘醌成分：碱性反应的方法25%w/vNa₂CO₃水溶液；4%v/vHCHO水溶液；5%v/v邻二硝基苯的苯溶液各1滴，加微量的化合物，混合后在水浴上加热至温度在50～70℃，1～4分钟内产生紫蓝色；

G、经核磁共振谱、红外、质谱分析确证六个单体分别为去氧紫草素、紫草素、乙酰紫草素、β-羟基异戊酰紫草素；异丁酰紫草素、β，β一二甲基丙烯酰紫草素，并依次命名单体化合物为ZCⅠ；ZCⅡ；ZCⅢ；ZCⅣ；ZCⅣ；ZCⅥ，经高压液相色谱测试，六个化合物的纯度分别是ZCⅠ为99.62%；ZCⅡ为99.02%；ZCⅢ为99.5%；ZCⅣ为99.31%；ZCⅤ为99.3%；ZCⅥ为99.2%。