[发明专利]表达NY-ESO-1重组耻垢分枝杆菌的制备及应用

权利要求书

1.一种用于重组肿瘤-睾丸抗原NY-ESO-1蛋白表达的质粒，所述质粒包含：

(a)β-半乳糖苷酶信号肽编码序列或β-半乳糖苷酶编码序列；和

(b)NY-ESO-1编码序列。

2.如权利要求1所述的质粒，其特征在于，所述重组NY-ESO-1蛋白是β-半乳糖苷酶信号肽序列与NY-ESO-1的融合蛋白、或β-半乳糖苷酶全长序列与NY-ESO-1的融合蛋白。

3.如权利要求1所述的质粒，其特征在于，

所述β-半乳糖苷酶信号肽编码序列选自如下所示的序列：GenBank号：L25634.1、SEQ ID NO：3所示序列编码的多肽、或它们的保守性变异蛋白或其活性片段、或其中的氨基酸序列经过1-20个(优选1-10个，更优选1-5个)氨基酸残基的取代、缺失或添加而形成的，且指导β-半乳糖苷酶定位于细胞壁或细胞膜上的信号序列；

所述β-半乳糖苷酶编码序列选择：GenBank号：L25634.1、SEQ ID NO：4所示序列、其同源序列或在严格条件下可与该序列杂交的序列；与所述编码核酸的序列具有至少75％、80％、90％、95％、98％或更高相同性的多核苷酸；

所述NY-ESO-1编码序列选自如下所示的序列：GenBank号U87459.1中所示序列、SEQ ID NO：1所示的序列、其同源序列或在严格条件下可与该序列杂交的序列；与所述编码核酸的序列具有至少75％、80％、90％、95％、98％或更高相同性的多核苷酸序列。

4.如权利要求1所述的质粒，其特征在于，所述质粒包含SEQ ID NO：5或SEQID NO：7所示的序列。

5.如权利要求1所述的质粒，其特征在于，所述质粒是穿梭质粒，其可在大肠杆菌、耻垢分枝杆菌或结核分枝杆菌中复制扩增。

6.如权利要求1所述的质粒，其特征在于，所述用于重组NY-ESO-1蛋白表达的质粒是基于选自下组的质粒构建的：pLA71、pLA73、pJH152或pJEM17。

7.一种重组耻垢分枝杆菌，其包含权利要求1-6中任一项所述的质粒。

8.如权利要求7所述的重组耻垢分枝杆菌，其特征在于，其表达重组的NY-ESO-1蛋白，并将该重组的蛋白定位于细胞壁。 

9.一种免疫组合物，所述组合物包含：

(i)权利要求1-6中任一项所述的质粒、权利要求7-8中任一项所述的重组耻垢分枝杆菌或其裂解物或细胞壁部分；和

(ii)免疫学上可接受的载体和/或佐剂。

10.权利要求1-6中任一项所述的质粒、权利要求7-8中任一项所述的重组耻垢分枝杆菌或其裂解物或细胞壁部分在制备用于预防和/或治疗NY-ESO-1阳性肿瘤的药物组合物或疫苗中的用途。

11.一种制备权利要求7或8所述的重组耻垢分枝杆菌的方法，所述方法包括如下步骤：

(1)提供权利要求1-6中任一项所述的质粒；

(2)用所述质粒转化耻垢分枝杆菌以获得权利要求7或8所述的重组耻垢分枝杆菌。