[发明专利]一种内切型木聚糖酶的制备方法

权利要求书

1.一种内切型木聚糖酶的制备方法，其特征在于：

富含半纤维素的玉米芯为原料，以一株新型木聚糖酶产生菌株——绿垂曲霉对该原料进行微生物发酵处理，制备高产量的内切型木聚糖酶，该酶可生产出该木糖含量低、聚合度为2至5的低聚木糖，并具有改善馒头的品质的作用。

2.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，

a.将收集到的富含腐败木质纤维材料的土样，置于以玉米芯木聚糖为唯一碳源的选择培养基上培养，初测木聚糖酶活力、结合色谱技术对木聚糖水解产物进行分析，选出一株内切木聚糖酶活力较高的霉菌菌株；通过形态学特征、培养特征征和β-tubulin、calmodulin基因序列分析，确定这是一株新型的木聚糖酶产生菌——绿垂曲霉M1701；

b.处理玉米芯原料：将无虫蛀、无霉变、干燥的玉米芯，粉碎至0.075mm-0.18mm的玉米芯粉，作为发酵的底物；

c.以绿垂曲霉(Aspergillus viridinutans)M1701为产酶菌，培养基条件为(g/L)：玉米芯粉，47；酵母浸膏，6；大豆蛋白胨，11；NaNO₃，3；KCl，0.5；KH₂PO₄，4；，MgSO₄·7H₂O，0.5，FeSO₄7H₂O，0.01；吐温-80，0.2；pH6.2。接种量为5×104个孢子/mL，液体发酵转速控制在200r/min，38℃培养5d，该培养液经离心得到的上清液即为木聚糖粗酶液；

d.对绿垂曲霉M1701产生的木聚糖粗酶液进行提纯，得到高纯度内切木聚糖酶；通过40％-70％硫酸铵沉淀、CM Sepharose Fast Flow离子交换层析和Sepharose high performance离子交换柱层析后，纯酶分子量约为21kDa。