[发明专利]一种南瓜籽抗氧化肽的制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种抗氧化肽的制备方法，具体为一种南瓜籽抗氧化肽的制备方法。

背景技术

随着人们生活水平的提高，活性氧和自由基导致的各种疾病严重危害了人类的健康，已经引起了社会各界的广泛关注。近年来，评价和筛选具有强抗氧化活性的天然资源已成为生物学、医学和食品科学研究的新趋势，而各种原料产生的抗氧化肽由于其低毒、高效等特点，成为国内外研究的热点。

目前，以酶水解蛋白质获得抗氧化肽的方法得到了很大的发展，各种不同来源的蛋白质在专一酶的作用下，得到了许多具有高抗氧化活性的肽段。近年来，从廉价易得的动植物原料制备抗氧化肽的研究有很多，这些原料主要有大豆蛋白、玉米蛋白、麦胚蛋白、乳蛋白、鱼类蛋白等，此外在牛奶蛋白、家蝇幼虫蛋白等动物蛋白原料，以及黑米、菜籽、灵芝、枸杞等植物蛋白原料中均获得了具有抗氧化作用的活性肽。由此可见，生产抗氧化肽的原料范围非常广泛。

南瓜籽作为南瓜的副产品，蛋白质含量高达30%～40%，南瓜籽含有平衡性很好的各种必需氨基酸，包括人体必需的8种氨基酸和儿童必需的组氨酸，并且有与人体所需氨基酸组成模式相似的必需氨基酸比例。南瓜籽蛋白质在人体中的吸收率可达88 %～97 %，生理效价为73 %～86 %，蛋白质的品质好、含量高，可见南瓜籽是一种优质的、廉价易得、产量巨大的植物蛋白资源。但是目前这些籽资源大多被用作饲料或被堆积甚至直接废弃，不仅造成资源的浪费，而且造成环境污染。其实南瓜籽经过清理、去皮后，可采用压榨法、浸出法、超临界CO₂ 萃取法等方法提取油脂，同时对提取的粗油进行精炼，即可得到香味浓郁、风味独特的南瓜籽油，其品质可以和大豆色拉油等油脂相媲美。提油后的饼粕含有丰富的蛋白质、维生素和矿物质等，在美国和加拿大早有将其加工成高蛋白的动物饲料或肥料的报道，目前开发的重点则是其中的蛋白质。国内对榨油后的南瓜籽饼粕未能充分开发利用，还处于起步阶段。李燕杰等对南瓜籽饼粕的可开发性和其中蛋白质资源的综合利用进行综述，提出了南瓜籽饼粕开发的两种思路，即作为全部蛋白原料和作为部分蛋白原料，指出南瓜籽蛋白产品和蛋白饮料的开发具有一定的市场前景。但是目前国内外对于南瓜籽多肽及其生理活性的研究几乎没有，还未见有将南瓜籽蛋白抗氧化肽作为抗氧化剂的报道，这对南瓜籽饼粕资源的开发具有重要的意义。

发明内容

本发明的目的在于提供一种原料来源广泛、制造成本低、抗氧化活性高的南瓜籽抗氧化肽的制备方法。

本发明是采用如下技术方案实现的：一种南瓜籽抗氧化肽的制备方法，包括以下步骤：（1）南瓜籽分离蛋白溶液的制备：以脱脂南瓜籽粉为原料，利用碱溶酸沉法得到南瓜籽分离蛋白，然后加水配制成质量浓度为4~8%的南瓜籽分离蛋白溶液，搅拌均匀；（2）酶解：将步骤（1）得到的南瓜籽分离蛋白溶液在沸水浴中加热5~15分钟使蛋白变性，冷却后调节pH到2.5~3.5，然后加蛋白酶5000~8000U/g，在45~55℃水浴中水解2~6h，水解过程中保持pH恒定；（3）灭酶离心后的酶解液通过超滤富集活性肽，最后经浓缩和冷冻干燥，得到南瓜籽抗氧化肽。

所述碱溶酸沉淀法提取南瓜籽蛋白的工艺条件是：温度为40~50℃，料液比为1∶30~40，pH值为10~11，浸提时间为1.5~2.5h。所述碱溶酸沉淀法为本领域公知技术，本发明通过单因素和正交实验确定了碱溶酸沉淀法提取南瓜籽蛋白的最佳工艺条件是条件为：温度为50℃，料液比为1∶30，pH值为11，浸提时间为1.5h，在此条件下蛋白质的提取率达到85.52%，纯度为91.07%。

所述的蛋白酶是酸性蛋白酶或木瓜蛋白酶或风味蛋白酶或2709碱性蛋白酶或Alcalase2.4L碱性蛋白酶中的任意一种。上述五种蛋白酶均为现有公知商品，其中酸性蛋白酶至少可从宁夏和氏璧生物技术有限公司购得，酶活力≥10万，木瓜蛋白酶至少可从广西南宁庞博生物工程有限公司购得，酶活力为80万U/g，风味蛋白酶至少可从广西南宁庞博生物工程有限公司购得，2709碱性蛋白酶至少可从天津诺奥科技发展有限公司购得，酶活力为20万U/g，Alcalase2.4L碱性蛋白酶至少可从丹麦Novo Nordisk 公司购得，酶活力为2.4AU-A/g。

所述超滤所用超滤膜的截留分子量为4KDa，超滤压力为0.15~0.25MPa、料液质量浓度为1~3%、料液pH为6~8，操作时间为50~70分钟。

所述离心时转速为4500~5500r/min，离心时间为10~30分钟。