[发明专利]成品烟烟丝总DNA的提取方法有效
| 申请号： | 201110172183.1 | 申请日： | 2011-06-24 |
| 公开（公告）号： | CN102286461A | 公开（公告）日： | 2011-12-21 |
| 发明（设计）人： | 李元实;马林;王春利;朴永革;金哲;崔成哲;于海顺 | 申请（专利权）人： | 吉林烟草工业有限责任公司;郑州轻工业学院 |
| 主分类号： | C12N15/10 | 分类号： | C12N15/10 |
| 代理公司： | 北京集佳知识产权代理有限公司 11227 | 代理人： | 朱建新;逯长明 |
| 地址： | 133000 吉林省延*** | 国省代码： | 吉林;22 |
| 权利要求书： | 查看更多 | 说明书： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 成品 烟丝 dna 提取 方法 | ||
1.一种成品烟烟丝总DNA的提取方法，包括以下步骤：
①、用65％～80％的乙醇水溶液浸泡成品烟烟丝，室温下7～9小时；过滤取滤液，40℃～50℃烘干；
②、向步骤①烘干产品中加入2×十六烷基三乙基溴化铵提取缓冲液，充分混匀，于60℃～70℃保温20～40min；
③、步骤②反应产物降温至室温，加入与步骤②提取缓冲液相同体积的氯仿/异戊醇混合液，混匀后离心，取上清液；
④、步骤③上清液中加入用量与步骤②提取缓冲液相同体积的2×十六烷基三乙基溴化铵提取缓冲液，以及用量与步骤②提取缓冲液相同体积的氯仿/异戊醇混合液，混匀；离心，取上清液；
⑤、向步骤④上清液中加入1～2倍体积的十六烷基三乙基溴化铵沉淀缓冲液，混匀，静置；离心，得沉淀物；
⑥、向步骤⑤的沉淀物中加入1.2～1.5mo l/L NaCl溶液，搅拌溶解；离心取上清液；
⑦、向步骤⑥得到的上清液中加入2～4倍体积经-20℃～-30℃预冷的无水乙醇，混匀，静置；离心，得沉淀物。
2.如权利要求1所述的提取方法，其特征在于：步骤③、④、⑤、⑥或⑦中离心的条件为12000～15000r/min，10～15min。
3.如权利要求1所述的提取方法，其特征在于：所述步骤②或④中2×十六烷基三乙基溴化铵提取缓冲液由下述组分构成：
4.如权利要求1所述的提取方法，其特征在于：所述步骤⑤中十六烷基三乙基溴化铵沉淀缓冲液由下述组分构成：
5.如权利要求1或3所述的提取方法，其特征在于：步骤②中的2×十六烷基三乙基溴化铵提取缓冲液为在65℃预热过的。
6.如权利要求1所述的提取方法，其特征在于：步骤①中用的乙醇水溶液为70％。
7.如权利要求1所述的提取方法，其特征在于：步骤①中浸泡时间为8小时。
8.如权利要求1所述的提取方法，其特征在于：步骤⑤中十六烷基三乙基溴化铵沉淀缓冲液的用量为上清液体积的2倍。
9.如权利要求1所述的提取方法，其特征在于：步骤⑤中静置为0.8～2小时。
10.如权利要求1所述的提取方法，其特征在于：步骤⑦中静置为20℃下静置30min。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息，商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于吉林烟草工业有限责任公司;郑州轻工业学院，未经吉林烟草工业有限责任公司;郑州轻工业学院许可，擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作，请联系【客服】
本文链接：http://www.vipzhuanli.com/pat/books/201110172183.1/1.html，转载请声明来源钻瓜专利网。
