[发明专利]miRNA吸收载体、其制备及用途

权利要求书

1.一种miRNA吸收载体，其携带从5’至3’依次包含如下元件的表达盒：

(a)II型启动子；

(b)指示蛋白编码序列；以及

(c)目的miRNA的吸收序列，所述吸收序列是2～10次重复的、与目的miRNA部分互补或完全互补的序列；

(d)任选的增强子序列。

2.如权利要求1所述的miRNA吸收载体，其特征在于，所述II型启动子优选：UBC、CAG、PGK、CMV启动子。

3.如权利要求1所述的miRNA吸收载体，其特征在于，所述指示蛋白选自：荧光蛋白、萤光素酶或者表达标签。

4.如权利要求1所述的miRNA吸收载体，其特征在于，所述目的miRNA选自下组：miR-29、miR-21和miR-146。

5.如权利要求1所述的miRNA吸收载体，其特征在于，所述吸收序列与目的miRNA的互补比例为78％～84％。

6.如权利要求1所述的miRNA吸收载体，其特征在于，所述表达盒自5’至3’依次包括：UBC启动子、绿色荧光蛋白eGFP序列以及miRNA吸收序列。

7.如权利要求1所述的miRNA吸收载体，其特征在于，所述吸收载体选自：质粒、噬菌体或病毒。

8.如权利要求7所述的miRNA吸收载体，其特征在于，所述载体是慢病毒载体，其特征在于，该慢病毒载体还包含慢病毒的包装所必须的序列。

9.一种制备慢病毒颗粒的方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：

(i)制备含权利要求1-6任一项中所记载的表达盒的慢病毒穿梭载体；

(ii)包装所述穿梭载体，并获得慢病毒颗粒；

(iii)任选的通过检测指示蛋白的表达确定病毒滴度。

10.一种慢病毒介导目的基因在T细胞中高表达的方法，其特征在于，所述方法包括用权利要求9所述的慢病毒感染T细胞，以使得感染后的T细胞高表达目的miRNA吸收序列的步骤。

11.一种产生转基因小鼠的方法，所述方法包括：

(a)提供如权利要求1～8中任一项所述的miRNA吸收载体；

(b)用该miRNA吸收载体显微注射小鼠受精卵，并将其分别移植到假孕母鼠输卵管；

(c)待所述母鼠生产小鼠后，检验并获得转基因小鼠；

(d)任选使所述转基因小鼠与其它小鼠配对以产生转基因后代。

12.权利要求1～8中任一项所述的miRNA吸收载体、用权利要求9所述的方法制备的慢病毒载体、权利要求11所述的方法生产的转基因小鼠在miRNA相关疾病的预防或治疗中的应用。

13.如权利要求12所述的应用，其特征在于，所述miRNA相关疾病选自：肿瘤、血液造血系统疾病、神经系统疾病、呼吸系统疾病、消化系统疾病、循环系统疾病、自身免疫病、风湿病、糖尿病、系统性硬化病、皮肤病、病毒感染、细菌感染以及骨分化、肌肉分化和肌肉相关疾病，优选细菌感染相关疾病和/或征状。