[发明专利]白癜风黑素细胞移植涂布载体系统的制备方法及其应用有效
申请号: | 201110175730.1 | 申请日: | 2011-06-28 |
公开(公告)号: | CN102266586A | 公开(公告)日: | 2011-12-07 |
发明(设计)人: | 鲁严;吴迪;朱文元;李雪;周梅华 | 申请(专利权)人: | 江苏省人民医院 |
主分类号: | A61L27/38 | 分类号: | A61L27/38;C12N5/071 |
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地址: | 210029 江*** | 国省代码: | 江苏;32 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 白癜风 细胞 移植 载体 系统 制备 方法 及其 应用 | ||
技术领域
本发明属于生物医学领域,尤其涉及一种白癜风黑素细胞移植涂布载体系统的制备方法及其应用。
背景技术
白癜风是一种常见的难治性皮肤色素脱失性疾病,组织病理上主要表现为黑素细胞的缺失。白癜风虽对健康无严重影响,但患者常为外观形象产生沉重的心理负担,影响工作、学习等正常生活,容易发展为心理疾病。传统的治疗手段包括药物治疗、物理疗法及外科手术等,因受药物及物理治疗有效率的限制,外科手术常成为白癜风患者的最终选择。常用的方法包括:自体表皮移植、黑素细胞悬液移植等,这些疗法虽有一定疗效但自体表皮移植仅适用于较小片白斑的治疗,对于较大白斑实际上可操作性较小;而黑素细胞悬液移植因缺乏载体固定从而造成细胞的流失,植入率低。
黑素细胞培养后移植是目前公认的治疗白癜风的有效手段之一,现有的黑素细胞培养基包含十四烷肽佛波醇乙酯(TPA)、霍乱毒素(CT)等促黑素细胞增殖因子,但它们具有一定的毒性作用,临床移植时可能存在一定的风险。虽然目前有学者以碱性成纤维生长因子(bFGF)、肝细胞生长因子(HGF)、干细胞因子(SCF)等取代TPA、CT,但其费用昂贵,手术成本高,难以推广,使得黑素细胞培养后移植的临床应用受到限制。
发明内容
本申请人针对上述的问题,进行了研究改进,提供一种白癜风黑素细胞移植涂布载体系统的制备方法及其应用,配置一种优良的黑素细胞培养基,使黑素细胞在体外能大量增殖;并且解决现有的细胞移植过程中细胞悬液易流失的问题,提高植入率,降低手术成本。
为了解决上述技术问题,本发明采用如下的技术方案:
一种白癜风黑素细胞移植涂布载体系统的制备方法,包括以下步骤:
(1)配置黑素细胞培养基:取黑素细胞基本培养液Hams F12 80~120份,加入胎牛血清FBS 8~12份,人粒细胞集落刺激因子G-CSF 0.16~0.24份,100ng/ml的促黑素生成素α-MSH 0.08~0.12份,异甲基黄嘌呤IBMX0.08~0.12份,1.5ug/ml的肾上腺素及维生素C混合液0.8~1.2份,青链双抗霉素0.8~1.2份,在4℃的冰箱中保存;
(2)黑素细胞的体外培养:①无菌条件下获得自体皮肤样本,清洗后用0.25%的胰蛋白酶-EDTA消化液在37℃条件下消化10min~15min;②终止消化,获取细胞悬液,离心,弃上清,收集沉淀黑素细胞,加入上述黑素细胞培养基,置于细胞培养箱以37℃、5%CO2、饱和湿度条件下孵育;每2~3天更换1次上述黑素细胞培养基;③根据黑素细胞生长和增殖情况,进行传代5~6代即可完成体外培养,制成黑素细胞悬液;
(3)涂布载体系统的合成:以卡波姆940凝胶为涂布载体,卡波姆940凝胶常规高压灭菌处理,按1∶4~6的体积比加至黑素细胞悬液,并均匀混合至嗜喱状。
进一步的:
所述黑素细胞培养基的优选组份为:黑素细胞基本培养液Hams F12 100份,胎牛血清FBS 10份,人粒细胞集落刺激因子G-CSF 0.20份,100ng/ml的促黑素生成素α-MSH 0.10份,异丁基甲基黄嘌呤IBMX 0.10份,1.5ug/ml的肾上腺素及维生素C混合液1.0份,青链双抗霉素1.0份。
一种白癜风黑素细胞移植涂布载体系统的应用,在无菌条件下磨削皮肤白斑至点状出血,均匀涂抹上述白癜风黑素细胞移植涂布载体系统,以油纱布覆盖,常规包扎。
本发明的目的之一在于针对现有技术的不足,配置一种优良的黑素细胞培养基,使黑素细胞在体外能大量增殖。这种培养基中含有人体自身能分泌的粒细胞集落刺激因子(G-CSF)。实验证明了黑素细胞能够表达G-CSF受体,且G-CSF对黑素细胞确具有促增殖作用。我们将黑素细胞接种至96孔板,分为A、B、C三组,每组细胞密度相同,设4个复孔;将浓度为0.0083g/L、0.0167g/L及0.0333g/L的G-CSF分别加入A、B、C组,于24h、48h、72h小时测量黑素细胞增殖率,结果如图1所示。此外,与TPA、bFGF等其他细胞因子相比,它还具有安全性高,成本费用低,增殖效果佳的优点,运用该培养基能够获得大量纯化的黑素细胞,为细胞移植打下了坚实的基础。
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