[发明专利]同时检测人EBV、BKV和 CMV的三重实时荧光定量PCR方法及试剂盒

权利要求书

1.同时检测人EBV、BKV和CMV的三重实时荧光定量PCR方法，其特征在于，所述实时 荧光定量PCR的反应体系中同时采用以下三套引物及探针：

CMV-FP：ATC AAC ATA AGG ACT TTT CAC ACT TT，

CMV-RP：GAA TAC AGA CAC TTA GAG CTC GGG GT，

CMV-探针：CTG GCC AGC ACG TAT CCC AAC AGC A-BHQ1；

EBV-FP：GGA ACC TGG TCA TCC TTT GC，

EBV-RP：ACG.TGC.ATG.GAC.CGG.TTA.AT，

EBV-探针：CGC.AGG.CAC.TCG.TACTGC.TCG.CT-BHQ1；

BKV-FP：AGT GGA TGG GCA GCC TAT GTA，

BKV-RP：TCA TAT CTG GGT CCC CTG GA，

BKV-探针：A GG TAG AAG A GG TTA GGG TGT TTG ATG GCA CA G-BHQ2；

CMV-探针，EBV-探针和BKV-探针的5’端标记的荧光素不同，分别为FAM，HEX和 ROX。

2.根据权利要求1所述的三重实时荧光定量PCR方法，所述实时荧光定量PCR的体系如下：

2×Quantitech Multiplex PCR NoRox Master Mix：12.5ul，5uM CMV-FP：0.5ul，5uM CMV-RP 0.5ul，uM CMV-探针1ul，5uM EBV-FP 0.5ul，5uM EBV-RP 0.5ul，5uM EBV-探针1ul，5uM BKV-FP 0.5ul，5uM BKV-RP 0.5ul，5uM BKV-探针1ul，待测模板1～3ul，补充双蒸水至25ul。

3.根据权利要求1所述的三重实时荧光定量PCR方法，所述实时荧光定量PCR的反应程序如 下：

Step 1  95℃  15min，

Step 2  94℃  60s，

Step 3  60℃  60s，

Step 4  读数，Go to step 2 for 40个循环。

4.同时检测人EBV、BKV和CMV的三重实时荧光定量PCR试剂盒，其特征在于包括如以 下核苷酸序列所示的引物及荧光探针：

CMV-FP：ATC AAC ATA AGG ACT TTT CAC ACT TT，

CMV-RP：GAA TAC AGA CAC TTA GAG CTC GGG GT，

CMV-探针：CTG GCC AGC ACG TAT CCC AAC AGC A-BHQ1；

EBV-FP：GGA ACC TGG TCA TCC TTT GC，

EBV-RP：ACG.TGC.ATG.GAC.CGG.TTA.AT，

EBV-探针：CGC.AGG.CAC.TCG.TACTGC.TCG.CT-BHQ1；

BKV-FP：AGT GGA TGG GCA GCC TAT GTA，

BKV-RP：TCA TAT CTG GGT CCC CTG GA，

BKV-探针：A GG TAG AAG A GG TTA GGG TGT TTG ATG GCA CA G-BHQ2；

CMV-探针，EBV-探针和BKV-探针的5’端标记的荧光素不同，分别为FAM，HEX和 ROX。

5.根据权利要求4所述的三重实时荧光定量PCR试剂盒，还包括EBV、BKV和CMV病毒 基因的三种病毒，每种病毒分别6个浓度梯度。