[发明专利]基于鸭瘟病毒 gG截段重组蛋白的试剂盒及其运用

权利要求书

1.鸭瘟病毒 gG截段重组蛋白在制备鸭瘟病毒抗体的诊断试剂中的应用,所述鸭瘟病毒 gG截段重组蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示。

2.基于鸭瘟病毒 gG截段重组蛋白的ELISA试剂盒，其特征在于：所述ELISA试剂盒包括固相支持物、抗体捕获剂、酶标二抗、底物、封闭液、终止液，所述抗体捕获剂为如SEQ ID NO:1所示的鸭瘟病毒 gG截段重组蛋白。

3.根据权利要求2所述的ELISA试剂盒，其特征在于：所述抗体捕获剂为浓度≥25μg/mL的鸭瘟病毒 gG截段重组蛋白。

4.根据权利要求2所述的ELISA试剂盒，其特征在于：所述酶标二抗为作2000倍体积稀释的羊抗鸭IgG-HRP。

5.用权利要求2所述的ELISA试剂盒检测鸭瘟病毒抗体的方法，所述方法还包括平行的阴性实验，其特征在于：

A、将鸭瘟病毒 gG截段重组蛋白与固相支持物连接，用封闭液封闭，洗涤去除未结合的抗原及杂质，得固相抗原；

B、将待检血清通过保温反应使待测血清与步骤A所得固相抗原结合形成固相抗原抗体复合物，洗涤去除固相载体上杂质；

C、将所述酶标二抗与所述固相抗原抗体复合物结合，得抗原—抗体—二抗复合物；

D、在步骤c所得抗原—抗体—二抗复合物加入色原底物避光显色后，加入终止液终止反应得显色样品液；

E、将步骤d所述显色液用酶标仪测OD_450nm值，待检血清的OD_450nm值值＞阴性样品OD_450nm值值的临界值，即X+3SD时判定为阳性，反之则为阴性，其中X为阴性样品OD_450nm值值的均值，SD为阴性样品OD_450nm值值的标准方差。

6.根据权利要求5所述的ELISA试剂盒检测鸭瘟病毒抗体的方法，其特征在于：

A、将浓度≥25μg/mL的鸭瘟病毒 gG截段重组蛋白与固相支持物连接，用封闭液封闭，洗涤去除未结合的抗原及杂质，得固相抗原；

B、将待检血清作80倍体积稀释得稀释血清，通过保温反应使所述稀释血清与步骤A所得固相抗原结合形成固相抗原抗体复合物，洗涤去除固相载体上杂质；

C、将羊抗鸭IgG-HRP作2000倍体积稀释后与所述固相抗原抗体复合物结合，得抗原—抗体—二抗复合物；

D、在步骤c所得抗原—抗体—二抗复合物加入色原底物避光显色后，加入终止液终止反应得显色样品液；

E、将步骤d所述显色液用酶标仪测测OD_450nm值，待检血清的OD₄₅₀nm值＞0.22时则为阳性，反之则为阴性。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于：步骤A中所述鸭瘟病毒 gG截段重组蛋白、步骤b中所述稀释血清及步骤c中所述酶标二抗稀释液的加入量为等体积。