[发明专利]基于鸭瘟病毒 gG截段重组蛋白的试剂盒及其运用

说明书

技术领域

本发明涉及生物工程领域，特别涉及检测鸭瘟病毒抗体的试剂盒及检测方法。

背景技术

鸭瘟(Duck Plague,DP)是由疱疹病毒科中的鸭瘟病毒(Duck plague virus,DPV)引起的鸭、鹅和天鹅等水禽的一种急性、热性、接触性传染的败血性传染病。该病可导致商品水禽产蛋量下降及死亡，对野生水禽也有不同的致死率。DP的临床表现为精神沉郁，高热稽留，两腿麻痹、下痢、流泪，部分病鸭头颈肿大,是一种广泛嗜全身性感染的传染病，临床以急性败血症过程为特征；病理剖解特征是血管损伤，组织器官出血，消化道出血、炎症和坏死，消化道粘膜某些特定部位有疹状损害，淋巴器官受损以及实质器官的退行性变化，其发病率和死亡率都甚高。近年来，随着养鸭业生产向集约化、规模化的方向发展，鸭瘟作为威胁养鸭业最严重的接触性传染病之一，造成了巨大的经济损失。

过去对鸭瘟病毒血清抗体的检测方法主要是利用全病毒作为抗原进行检测，但传统的病毒分离鉴定方法大约需要4～5天，方法繁琐，费时费力，且纯化后的病毒中会掺杂有许多宿主细胞成分，导致假阳性结果出现。

发明内容

本发明的目的之一在于提供鸭瘟病毒 gG截段重组蛋白的应用，该应用为鸭瘟病毒的抗体检测提供了新思路。

为实现上述目的，本发明的技术方案为：

鸭瘟病毒 gG截段重组蛋白在制备鸭瘟病毒抗体的诊断试剂中的应用,所述鸭瘟病毒 gG截段重组蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示。

本发明的目的之二在于提供一种ELISA试剂盒，其用于检测鸭瘟病毒时特异性、敏感性及稳定性高。

为实现上述方案，本发明的技术方案为：

基于鸭瘟病毒 gG截段重组蛋白的ELISA试剂盒，所述ELISA试剂盒包括固相支持物、抗体捕获剂、酶标二抗、底物、封闭液、终止液，所述抗体捕获剂为如SEQ ID NO:1所示的鸭瘟病毒 gG截段重组蛋白。

进一步，所述抗体捕获剂为浓度≥25μg/mL的鸭瘟病毒 gG截段重组蛋白。

进一步，所述酶标二抗为作2000倍体积稀释的羊抗鸭IgG-HRP。

本发明的目的之三在于提供一种鸭瘟病毒抗体的检测方法，该方法操作简单，适用于大规模应用。

为实现上述目的，本发明的技术方案为:

用所述的ELISA试剂盒检测鸭瘟病毒抗体的方法，所述方法还包括平行的阴性实验，具体为：

A、将鸭瘟病毒 gG截段重组蛋白与固相支持物连接，用封闭液封闭，洗涤去除未结合的抗原及杂质，得固相抗原；

B、将待检血清通过保温反应使所述稀释血清与步骤A所得固相抗原结合形成固相抗原抗体复合物，洗涤去除固相载体上杂质；

C、将所述酶标二抗与所述固相抗原抗体复合物结合，得抗原—抗体—二抗复合物；

D、在步骤c所得抗原—抗体—二抗复合物加入色原底物避光显色后，加入终止液终止反应得显色样品液；

E、将步骤d所述显色液用酶标仪测测OD_450nm值，待检血清的OD_450nm值＞阴性样品OD_450nm值的临界值，即X+3SD时判定为阳性，反之则为阴性，其中X为阴性样品OD_450nm值的均值，SD为阴性样品OD_450nm值的标准方差。

进一步，所述的ELISA试剂盒检测鸭瘟病毒抗体的方法具体为：

A、将浓度≥25μg/mL的鸭瘟病毒 gG截段重组蛋白与固相支持物连接，用封闭液封闭，洗涤去除未结合的抗原及杂质，得固相抗原；

B、将待检血清作80倍稀释得稀释血清，通过保温反应使所述稀释血清与步骤A所得固相抗原结合形成固相抗原抗体复合物，洗涤去除固相载体上杂质；

C、将羊抗鸭IgG-HRP作2000倍体积稀释的后与与所述固相抗原抗体复合物结合，得抗原—抗体—二抗复合物；

D、在步骤c所得抗原—抗体—二抗复合物加入色原底物避光显色后，加入终止液终止反应得显色样品液；

E、将步骤d所述显色液用酶标仪测测OD_450nm值，待检血清的OD450nm值＞0.22时则为阳性，反之则为阴性。

进一步，步骤A中所述鸭瘟病毒 gG截段重组蛋白、步骤b中所述稀释血清及步骤c中所述酶标二抗稀释液的加入量为等体积。