[发明专利]基于有性杂交的大花蕙兰种苗工厂化生产方法

权利要求书

1.一种基于有性杂交的大花蕙兰种苗工厂化生产方法，其特征在于它包括的步骤：

首先对大花蕙兰亲本的染色体数目和倍性进行鉴定；根据倍性选配杂交组合；进行大花蕙兰有性杂交授粉；大花蕙兰授粉后的管理；大花蕙兰种子非共生萌发培养；大花蕙兰种子原球茎(PLBs)的诱导与分化；大花蕙兰成苗分化；大花蕙兰瓶苗移栽；大花蕙兰移栽苗的栽培管理。

2.一种基于有性杂交的大花蕙兰种苗工厂化生产方法，其特征在于它包括的步骤：

1)首先必须对大花蕙兰亲本的染色体数目和倍性进行鉴定：切取大花蕙兰新生长的根尖，放在0.02％秋水仙碱水溶液或对二氯苯饱和水溶液中处理4h，然后将根尖移入体积比为3∶1的甲醇∶冰醋酸的固定液中，应用酶解去壁低参法或卡宝品红压片法观察染色体数目；大花蕙兰染色体基数x＝19，二倍体2n＝36，三倍体2n＝3x＝57，四倍体2n＝4x＝76，大花蕙兰中常有非整倍体(2n±x)品种；

2)根据倍性配制大花蕙兰有性杂交组合育种：按照正常方式，在2x♀×2x♂或4x♀×4x♂进行异株或同株异花授粉；大花蕙兰开花后7-10天的花进行授粉，授粉后2-3天蕊柱颜色开始变深，表明授粉已成功，授粉3-6个月后果实成熟，期间的温度：10-20℃，湿度：40-60％，保持通风，半透光；杂交所产生的种子为三倍体种子，即：2x♀×4x♂或4x♀×2x♂→F1(3x)；

3)在授粉后4-6个月，在种子尚未成熟或接近成熟时，进行大花蕙兰种子非共生萌发培养：剪下大花蕙兰果实，在超净工作台内，将剪下的大花蕙兰果实先用蒸馏水冲洗1-2次，75％酒精表面消毒30-40秒，然后在0.1％升汞水溶液中浸泡8-10分钟，无菌蒸馏水冲洗3次，用解剖刀切开果实，将大花蕙兰种子接种在pH 5.6-58的MS液体培养基中，在20-25℃条件下振荡培养一周，至种子萌发；

4)在90％大花蕙兰种子萌发后，转入MS+6-BA 5mg·L^-1培养基中，进行原球茎诱导培养，当原球茎大量产生后，转入1/2MS+6-BA 2mg·L^-1+NAA 2mg·L^-1固体培养基中进行成苗分化培养，培养室开始加光照，继续培养；

5)当大花蕙兰瓶苗生长至培养瓶1/2-2/3高度，新根生长盛期，至成苗分化3-4片叶，新生根2-3条时，进行瓶苗移栽；

6)在瓶苗移栽前4-5天，打开培养瓶盖先进行练苗，移栽时用清水洗去培养基，将瓶苗先放在网盘中在阴凉处晒1-2天，然后定植在盛有栽培基质的塑料盆中，刚移栽出来的大花蕙兰幼苗要精心管理。

7)移栽后的大花蕙兰种苗夏季放在室外自然林下培养，昼夜温度为15-28℃，冬季转入温室，昼夜温度为5-25℃。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于步骤4)所述的光照培养条件为：每天光照12-14h，光强度为1500lx，20-25℃。

4.根据权利要求2所述的方法，其特征在于步骤6)所述的精心管理为：在50％光照条件下，注意通风，保持50％以上湿度。

5.根据权利要求2所述的方法，其特征在于步骤6)所述的栽培基质为：树皮∶松针∶苔藓＝3∶2∶1混合基质。