[发明专利]基于有性杂交的大花蕙兰种苗工厂化生产方法

说明书

技术领域：

本发明涉及名贵花卉种苗组织培养繁殖技术，特别是一种基于有性杂交的大花蕙兰种苗工厂化生产方法，具有重要应用价值。

背景技术：

大花蕙兰(Cymbidium hybridmum)，是兰属杂交品种的总称，它起源于上世纪初期，到四五十年代才开始大发展起来，至1966年第五届世界兰花大会，大花蕙兰杂交品种一举摘取了40枚奖牌，进入了发展的高峰期。由于大花蕙兰花大，花色丰富，深受西方人喜爱，在西方很快就发展起来。到70年代，日本、新加波、韩国和我国台湾也相继发展起来。我国大陆改革开放后，也引进了大花蕙兰，但多为开花或开花前的成品植株。关于杂交培育或从种子原球茎开始工厂化生产的种苗培育的大花蕙兰，还未见报道。用于大花蕙兰杂交种的主要亲本，主要是大花型的附生兰，目前已知的有近20种，其中很多中国都有，如虎头兰(Cy.hookerianum)、美花兰(Cy.insigne)、碧玉兰(Cy.lowianum)、多花兰(Cy.floribundum)、西藏虎头兰(Cy.tracyanum)、独占春(Cy.eburneum)等。这些亲本原生种大多分布在喜马拉雅山东段，海拨1000-3000m，有干湿季，冬季干旱寒冷但无霜冻，夏季温暖湿润，但不炎热。因此，只要冬季夜间温度在5-10℃，不低于5℃，在夏季不高于27℃，保持昼夜温差，就可进行大花蕙兰杂交育种，进行新品种选育。但是，目前我国对大花蕙兰杂交育种工作还刚刚起步，很多基础研究有待开展。

发明内容：

本发明的目的是提供一种基于有性杂交的大花蕙兰种苗工厂化生产方法，采用大花蕙兰种间、品种间、品种内有性杂交获得的种子，在种子尚未成熟或接近成熟时，将种子接种在MS液体培养基中，进行非共生萌发培养，在种子原球茎分化后，转入1/2MS固体培养基中继续培养至成苗，再进行瓶苗移栽。本发明是进行有性杂交授粉，达到品种改良和新品种选育的目的，再通过组织培养方法，可进行大花蕙兰种苗工厂化的大量生产。

本发明提供的一种基于有性杂交的大花蕙兰种苗工厂化生产方法包括的步骤：

首先对大花蕙兰亲本的染色体数目和倍性进行鉴定；根据倍性选配杂交组合；进行大花蕙兰有性杂交授粉；大花蕙兰授粉后的管理；大花蕙兰种子非共生萌发培养；大花蕙兰种子原球茎(PLBs)的诱导与分化；大花蕙兰成苗分化；大花蕙兰瓶苗移栽；大花蕙兰移栽苗的栽培管理。

本发明提供的一种基于有性杂交的大花蕙兰种苗工厂化生产方法包括的步骤：

1)首先必须对大花蕙兰亲本的染色体数目和倍性进行鉴定：切取大花蕙兰新生长的根尖，放在0.02％秋水仙碱水溶液或对二氯苯饱和水溶液中处理4h，然后将根尖移入体积比为3∶1的甲醇∶冰醋酸的固定液中，应用酶解去壁低参法(WDH)或卡宝品红压片法观察染色体数目；大花蕙兰染色体基数x＝19，二倍体2n＝36，三倍体2n＝3x＝57，四倍体2n＝4x＝76，大花蕙兰中常有非整倍体(2n±x)品种；

2)根据倍性配制大花蕙兰有性杂交组合育种：按照正常方式，在2x♀×2x♂、4x♀×4x♂和2x♀×4x♂或4x♀×2x♂进行同株异花或异株授粉；大花蕙兰开花后7-10天的花进行授粉，授粉后2-3天蕊柱颜色就开始变深，表明授粉已成功，授粉3-6个月后果实成熟，期间的温度10-20℃和较高湿度40-60％，通风，半透光；2x♀×4x♂或4x♀×2x♂杂交所产生的种子为三倍体种子，即：2x♀×4x♂或4x♀×2x♂→F1(3x)；

在大花蕙兰中，一般而言，同一倍性内容易杂交成功，如2x♀×2x♂、4x♀×4x♂，同一倍性内杂交，要尽量避开自花授粉，要采用异株或同株异花授粉；2x♀×4x♂或4x♀×2x♂→F1为三倍体(3x)；三倍体因为没有正常的配子，所以不能用于作亲本使用。

大花蕙兰授粉后约7天子房开始发育，但是，由于大花蕙兰授粉后，胚胎才开始发育，在授粉40-50天才受精，合子有一个40-45天的休眠期，所以，一般在授粉3-6个月后，果实才能成熟。

3)在授粉后4-6个月，在种子尚未成熟或接近成熟时，进行大花蕙兰种子非共生萌发培养：剪下大花蕙兰果实，在超净工作台内，将剪下的大花蕙兰果实先用蒸馏水冲洗1-2次，75％酒精表面消毒30-40秒，然后在0.1％升汞水溶液中浸泡8-10分钟，无菌蒸馏水冲洗3次，用解剖刀切开果实，用小药勺将大花蕙兰种子接种在MS液体培养基中，在20-25℃条件下振荡培养一周左右，至种子萌发。